菌落計(jì)數(shù)器使用方法

　　菌落計(jì)數(shù)器在培養(yǎng)皿上計(jì)算微生物的數(shù)目是一件非常耗時(shí)的工作。有了菌落計(jì)數(shù)器這種儀器，就不必為這項(xiàng)復(fù)雜的操作費(fèi)心了，它可廣泛應(yīng)用在每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室中。

菌落計(jì)數(shù)的意義

　　1、菌落是什么

　　菌落是指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖而形成的能被肉眼識(shí)別的生長(zhǎng)物，它是由數(shù)以萬(wàn)計(jì)相同的微生物集合而成。當(dāng)樣品被稀釋到一定程度，與培養(yǎng)基混合，在一定培養(yǎng)條件下，每個(gè)能夠生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌細(xì)胞都可以在平板上形成一個(gè)可見的菌落。菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后(如培養(yǎng)基成分培養(yǎng)溫度和時(shí)間、PH值、需氧性等)所取1ml(g)檢樣中所含菌落的總數(shù)。

　　2、菌落的危害

　　食品的菌落總數(shù)嚴(yán)重超標(biāo)，說明其產(chǎn)品的衛(wèi)生狀況達(dá)不到基本的衛(wèi)生要求，將會(huì)破壞食品的營(yíng)養(yǎng)成分，加速食品的腐敗變質(zhì)，使食品失去食用價(jià)值。消費(fèi)者食用微生物超標(biāo)嚴(yán)重的食品，很容易患痢疾等腸道疾病，可能引起嘔吐、腹瀉等癥狀，危害人體健康安全。

　　3、菌落計(jì)數(shù)的單位

　　菌落形成單位叫做CFU。CFU的含義是形成菌落的菌落個(gè)數(shù)，不等于細(xì)菌個(gè)數(shù)。(比如兩個(gè)相同的細(xì)菌靠得很近或貼在一起，那么經(jīng)過培養(yǎng)這兩個(gè)細(xì)菌將會(huì)形成一個(gè)菌落，此時(shí)就是2個(gè)細(xì)菌，1CFU)。

　　菌落計(jì)數(shù)器采用的是平板計(jì)數(shù)法，經(jīng)過培養(yǎng)后我們數(shù)出平板上所生長(zhǎng)出的菌落個(gè)數(shù)，國(guó)產(chǎn)菌落計(jì)數(shù)器從而計(jì)算出每毫升或每克待檢樣品中可以培養(yǎng)出多少個(gè)菌落，于是以CFU/ml或CFU/g報(bào)告之。

　　4、菌落計(jì)數(shù)的作用

　　菌落計(jì)數(shù)器可以判定食品被污染的程度，也可以用于觀察細(xì)菌對(duì)食品污染的程序，還可以用于觀察細(xì)菌在食品繁殖的動(dòng)態(tài)，以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。

菌落計(jì)數(shù)器的操作方法

　　1、將電源插頭插入220V電源插座內(nèi)。將探筆插入菌落計(jì)數(shù)器上的探筆插孔內(nèi)。

　　2、將電源開關(guān)撥向開，計(jì)數(shù)池內(nèi)燈亮。同時(shí)顯示窗內(nèi)顯示明亮的，表示允許進(jìn)行計(jì)數(shù)。

　　3、將待檢的培養(yǎng)皿底朝上放入計(jì)數(shù)池內(nèi)。用探筆在培養(yǎng)皿底面對(duì)所有的菌落逐個(gè)點(diǎn)數(shù)。此時(shí)，菌落處被標(biāo)上顏色，顯示窗內(nèi)數(shù)字自動(dòng)累加。

　　4、用放大鏡仔細(xì)檢查，確認(rèn)點(diǎn)數(shù)無遺漏，計(jì)數(shù)即已完畢。

　　5、顯示窗內(nèi)的數(shù)字即為該培養(yǎng)皿內(nèi)的菌落數(shù)。

　　6、記錄數(shù)字后取出培養(yǎng)皿。按復(fù)按鈕，顯示恢復(fù)，為另一培養(yǎng)皿的計(jì)數(shù)做好準(zhǔn)備。

菌落計(jì)數(shù)器的計(jì)數(shù)原則

　　菌落計(jì)數(shù)器基本操作一般包括：樣品的稀釋→傾注平皿→培養(yǎng)48小時(shí)→計(jì)數(shù)報(bào)告

　　1、培養(yǎng)到時(shí)間后，計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的菌落數(shù)?？捎萌庋塾^察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落總數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)，計(jì)算處原始樣品中每克(或每ml)中的菌落數(shù)，進(jìn)行報(bào)告。

　　2、到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放置于0-4℃，但不得超過24h。

　　3、計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)在30~300之間的平板(SN標(biāo)準(zhǔn)要求為25~250個(gè)菌落)，若有二個(gè)稀釋度均在30~300之間時(shí)，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法要求應(yīng)以二者比值決定，比值小于或等于2取平均數(shù)，比值大于2則其較小數(shù)字(有的規(guī)定不考慮其比值大小，均以平均數(shù)報(bào)告)。

　　4、若所有稀釋度均不在計(jì)數(shù)區(qū)間。如均大于300，則取Zgao稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如均小于30，則以Zdi稀釋度的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如菌落數(shù)有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之間，則應(yīng)以Z接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。如所有稀釋度均無菌落生長(zhǎng)，則應(yīng)按小于1乘以Zdi稀釋倍數(shù)報(bào)告之。有的規(guī)定對(duì)上述幾種情況計(jì)算出的菌落數(shù)按估算值報(bào)告。

　　5、不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比(同一稀釋度的二個(gè)平板的菌落數(shù)應(yīng)基本接近)，即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少，稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈多。如出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，則應(yīng)視為檢驗(yàn)中的差錯(cuò)(有的食品有時(shí)可能出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，如酸性飲料等)，不應(yīng)作為檢樣計(jì)數(shù)報(bào)告的依據(jù)。

　　6、當(dāng)平板上有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，如呈鏈狀生長(zhǎng)的菌落之間無任何明顯界限，則應(yīng)作為一個(gè)菌落計(jì)，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應(yīng)按一個(gè)菌落計(jì)算，不要把鏈上生長(zhǎng)的每一個(gè)菌落分開計(jì)數(shù)。如有片狀菌落生長(zhǎng)，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個(gè)平板的菌落數(shù)乘2代表全平板的菌落數(shù)。

　　7、當(dāng)計(jì)數(shù)平板內(nèi)的菌落數(shù)過多(即所有稀釋度均大于300時(shí))，但分布很均勻，可取平板的一半或1/4計(jì)數(shù)。再乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)作為該平板的菌落數(shù)。

　　8、菌落數(shù)的報(bào)告，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定菌落數(shù)在1~100時(shí)，按實(shí)有數(shù)字報(bào)告，如大于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算。固體檢樣以克(g)為單位報(bào)告，液體檢樣以毫升(ml)為單位報(bào)告，表面涂擦則以平方厘米(cm²)報(bào)告。

菌落計(jì)數(shù)器的注意事項(xiàng)

　　1、菌落計(jì)數(shù)器應(yīng)放置在平整牢固的試驗(yàn)臺(tái)上使用。

　　2、點(diǎn)數(shù)菌落時(shí)，探筆不要過于傾斜，輕輕點(diǎn)下至有彈跳感時(shí)，數(shù)字即被輸入。

　　3、菌落計(jì)數(shù)器應(yīng)防潮、防強(qiáng)烈震動(dòng)、防直接日光曝曬、防酸堿侵蝕，用后應(yīng)加防塵罩。

　　4、注意防止細(xì)菌培養(yǎng)物污染計(jì)數(shù)池。

　　5、菌落計(jì)數(shù)器及探筆均不得隨意拆卸，若發(fā)現(xiàn)故障，應(yīng)請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員檢修。

　　6、菌落計(jì)數(shù)器使用后或放置長(zhǎng)時(shí)間后放大鏡表面會(huì)有灰塵，選用純化水稍清洗，然后用鏡頭紙擦拭干凈待用。