瓊脂糖凝膠電泳步驟

瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。對于分子量較大的樣品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。

瓊脂糖凝膠電泳步驟

1.緩沖液的制備

（1）TAE或者TBE為常用的緩沖液，PH值在6-9之間。

（2）不管是TAE或者TBE均含有EDTA，其能夠將二價金屬離子去除。

2.瓊脂糖膠板的制備

（1）在三角瓶中放入一定量的瓊脂糖，將電泳緩沖液加入其中，使一定濃度的瓊脂糖溶液（PCR產物：1.2％；基因組DNA：0.8％）配制完成。

（2）在制膠架上插上選好的梳子，在制膠架中放入選好的凝膠盤。

（3）將溶液加熱煮沸澄清，冷卻到60攝氏度將10毫克/毫升EB加入其中，搖勻后往制膠架中倒入。

（4）放置在室溫環境中30-40min等到凝膠聚合后，將梳子輕輕拔掉（注意：先拔一側，不然垂直拔除產生真空造成部分凝膠帶出）。

3.將電泳緩沖液加入到兩邊的槽中，使得凝膠被全部浸沒，液面應該比膠面高1毫米。

4.在梳井內加樣，注意預防氣泡被引入。

5.將上蓋蓋好，將電泳儀接通。

6.電壓需要按照實際情況來選擇比較合適的。長膠需要比較高的電壓，然而高電壓會縮短電泳的時間，發熱高，分辨率低，其對于樣品的篩選或者樣品純度的檢查很適合。相反，電壓低，發熱少，分辨率比較高，然而耗費時間長。

7.在完成電泳實驗后，應當首先將電泳儀關閉，然后將電源線拔除，再將電泳槽上蓋打開，將凝膠托盤取出來。