DNA合成儀發(fā)展

用于和DNA或RNA結(jié)構(gòu)類似的寡核苷酸合成的自動(dòng)化儀器，即是DNA合成儀。通常用于固相合成法，每次在長的寡核苷酸鏈上接入一個(gè)核苷酸。加入每一個(gè)核苷酸均通過相同的化學(xué)反應(yīng)和相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。儀器不同，所用化學(xué)反應(yīng)和操作細(xì)節(jié)也會(huì)隨之發(fā)生變化。DNA合成的磷酸酰胺法得到了非常廣泛的應(yīng)用。

發(fā)展

GX率、高產(chǎn)率的儀器的開發(fā)與研究、應(yīng)用領(lǐng)域的開拓和機(jī)器性能的完善為當(dāng)前DNA合成儀的主要生產(chǎn)廠商的致力方向。

全世界di一臺(tái)高密度復(fù)制DNA合成儀已經(jīng)為臺(tái)灣科學(xué)委員會(huì)“基因醫(yī)藥衛(wèi)生科技研究計(jì)劃”中的基因生物技術(shù)組成功研發(fā)出來，每天能夠?qū)?68條DNA進(jìn)行合成，能夠同時(shí)對(duì)384條不同DNA進(jìn)行合成。并且能夠和聚合酶連鎖反應(yīng)裝置相配合，對(duì)各種基因大量復(fù)制，除了對(duì)時(shí)間進(jìn)行節(jié)省外，還能夠?qū)Υ罅咳肆M(jìn)行節(jié)省。這部機(jī)器能夠?qū)⒎纻位颉?dòng)物、人體、植物的基因甚都復(fù)制出來。

因?yàn)槟壳癉NA合成儀可以合成的Z長核酸鏈的堿基對(duì)數(shù)量對(duì)于人們所需要的大部分核酸的堿基對(duì)數(shù)量來說還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，所以，還需要對(duì)合成工藝不斷地進(jìn)行改善，才能夠使較長的核酸分子得到。

不斷涌現(xiàn)出按照不同化學(xué)方法研制的DNA合成儀，可以將現(xiàn)有核酸合成的堿基對(duì)數(shù)量限制突破，使大量人力、物力、財(cái)力得以節(jié)省，以便將來能夠?qū)γ傅慕Y(jié)構(gòu)進(jìn)行改變，使其在工業(yè)上更有價(jià)值。對(duì)蛋白質(zhì)和多肽的結(jié)構(gòu)進(jìn)行改變，使新藥物得以制備，并且對(duì)有關(guān)人類疾病和遺傳調(diào)控的新領(lǐng)域進(jìn)行了開拓。

有效方法

分離和制造目的基因的一些有效方法在基因工程學(xué)工作者艱苦細(xì)致的探索研究下已經(jīng)掌握了。通常而言，目前有反向轉(zhuǎn)錄法、基因組擴(kuò)增法、人工合成三種獲取目的基因的方法。

1、人工合成

全長引物根據(jù)某一蛋白質(zhì)的基因序列或氨基酸序列，進(jìn)行設(shè)計(jì)，模版DNA通過OVERLAP方法來形成，再利用PCR擴(kuò)增的方法使雙鏈DNA得到，之后在克隆載體或者表達(dá)載體中轉(zhuǎn)化克隆PCR產(chǎn)物。目前為止，速度Z快，準(zhǔn)確率Z高的方法是化學(xué)合成全基因，同時(shí)能夠以密碼子在不同宿主細(xì)胞的不同的實(shí)驗(yàn)需求和偏愛性，對(duì)基因序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，使表達(dá)水平得以提高。

2、反向轉(zhuǎn)錄法

對(duì)于分子量較大而又不知其序列的基因，反向轉(zhuǎn)錄法比較適用，其的模板為目的基因的mRNA，對(duì)上下游引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，對(duì)反轉(zhuǎn)錄酶合成堿基互補(bǔ)的DNA片段進(jìn)行借助，然后再在DNA聚合酶的作用下將雙鏈cDNA合成，也就是目的基因的雙鏈DNA。

3、基因組擴(kuò)增法

基因組能夠通過基因組抽提試劑盒直接從細(xì)胞、植物、血液、動(dòng)物組織中分離出來，對(duì)特異擴(kuò)增的引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，模版利用抽提的基因組，直接通過PCR擴(kuò)增來對(duì)目的基因進(jìn)行獲取。