酶標(biāo)儀檢定規(guī)程

　　酶標(biāo)儀在實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用越來(lái)越普及，酶標(biāo)儀的檢定也就越來(lái)越重要。酶標(biāo)儀的檢定內(nèi)容主要包括干涉濾光片波長(zhǎng)誤差及重復(fù)性、吸光度誤差、穩(wěn)定性和重復(fù)性、儀器靈敏度、通道差異及吸光度的線性。

　　吸光度示值穩(wěn)定性(r)的檢定：

　　選用492nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片，平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，測(cè)量并記錄酶標(biāo)儀的初始吸光度示值(A₀)，5min、10min后分別再測(cè)一次。吸光度示值穩(wěn)定性(r)計(jì)算：r等于后兩次吸光度示值的Zda值與A₀的差。

　　波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性的檢定：

　　從酶標(biāo)儀取出儀器所用有標(biāo)稱波長(zhǎng)(λ)的干涉濾光片(405，450，492，620nm)，使用波長(zhǎng)示值誤差優(yōu)于±0.5nm的分光光度計(jì)，將干涉濾光片用1mm左右銅或鋁金屬絲懸掛固定于分光光度計(jì)比色杯架第二孔右外側(cè)，干涉濾光片平面需與入射光束垂直。以1nm的改變幅度，從低到高，檢測(cè)各干涉濾光片在(±20)nm范圍內(nèi)的透射比，繪制波長(zhǎng)一透射比特性曲線，求出峰值波長(zhǎng)(λ_i)，每片干涉濾光片重復(fù)檢測(cè)三次并求峰值波長(zhǎng)均值。

　　干涉濾光片波長(zhǎng)示值誤差(△λ)計(jì)算：△λ=峰值波長(zhǎng)均值-λ;波長(zhǎng)重復(fù)性(δ_λ)計(jì)算：δ_λ等于三次檢測(cè)峰值波長(zhǎng)Zda值和Z小值之差。

　　吸光度示值誤差的檢定：

　　先將吸光度標(biāo)稱值(A)分別為0.2，0.5，1.0，1.5的四塊光譜中性濾光片(分光光度計(jì)附件)，在分光光度計(jì)上依次選用405，450，492，630nm波長(zhǎng)或酶標(biāo)儀特有的專一波長(zhǎng)，以空氣為參比，檢測(cè)光譜中性濾光片的吸光度。每個(gè)濾光片每個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)三次，取均值作為該片在該波長(zhǎng)下的吸光度標(biāo)準(zhǔn)值(As)。然后，將四塊光譜中性濾光片同時(shí)平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，酶標(biāo)儀連續(xù)測(cè)量3次，依次記錄儀器吸光度示值，并計(jì)算平均值(Ax)。

　　吸光度示值誤差(△A)計(jì)算：△A=Ax-As，取計(jì)算后的所有△A中的誤差Zda值作為該酶標(biāo)儀的吸光度示值誤差。

　　吸光度重復(fù)性的檢定：

　　按吸光度示值計(jì)算的方法將吸光度標(biāo)稱值(A)為0.5或1.0光譜中性濾光片，以空氣為參比，于酶標(biāo)儀微孔酶標(biāo)板的空板架某一固定孔位重復(fù)測(cè)定6次(n)，記錄每一次吸光度(X_i)，求吸光度均值，按下式計(jì)算RSD偏差值(RSD)，以RSD表示儀器吸光度重復(fù)性。

　　靈敏度檢定：

　　選用450nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，使用量程適合并檢定合格的A級(jí)加樣器，在未包被的空板條某一孔加入200μl含鉻量為5mg/L的重鉻酸鉀溶液，測(cè)量并記錄吸光度值(A_m)，此吸光度值即為酶標(biāo)儀靈敏度。

　　通道差異檢定：

　　多通道酶標(biāo)儀選用450nm波長(zhǎng)或儀器特有的某一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值為1.0A光譜中性濾光片置于空板架上，以空氣為參比，依次檢測(cè)該濾光片在各通道的吸光度。通道差異(δ_A)計(jì)算：δ_A等于所有通道檢測(cè)吸光度中Zda值和Z小值的差。

　　線性驗(yàn)證：

　　將含鉻量為700mg/L的重鉻酸鉀溶液和0.05mol/L的硫酸溶液按比例(0：7，1：6，2：5，3：4，4：3，5：2，6：1，7：0)配成不同稀釋度的系列溶液共8管，每管取200μl加入未包被的空板條微孔，以450nm/630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度，重復(fù)測(cè)定兩次取均值，進(jìn)行回歸分析，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差(S_y,x)。

　　檢定結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)：

　　參照計(jì)量性能要求，酶標(biāo)儀檢定結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)為示值穩(wěn)定性(A)±0.005;波長(zhǎng)示值誤差(nm)±3;波長(zhǎng)重復(fù)性(nm)±1.5;吸光度示值誤差(A)±0.03;吸光度重復(fù)性(%)≤1.0;靈敏度(L/mg)≥0.006;通道差異(A)≤0.03(單通道酶標(biāo)儀無(wú)此項(xiàng)要求);線性±2.0%。

　　酶標(biāo)儀檢定對(duì)使用的設(shè)備、材料等都有具體而嚴(yán)格的要求，保證檢定結(jié)果的準(zhǔn)確可信。酶標(biāo)儀檢定工作的主要條件是實(shí)驗(yàn)室必須具備一臺(tái)經(jīng)計(jì)量部門檢定達(dá)I級(jí)合格的分光光度計(jì)，且附件配有完好的光譜中性濾光片，這對(duì)吸光度的誤差檢定非常重要，因?yàn)榉止夤舛扔?jì)和酶標(biāo)儀比色角度的不同，只能通過(guò)光譜中性濾光片檢定吸光度誤差。

　　酶標(biāo)儀的自檢是對(duì)儀器性能狀態(tài)的評(píng)價(jià)，也為儀器的維護(hù)、維修及配件的更換提供依據(jù)，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的基礎(chǔ)，具有性能優(yōu)良分光光度計(jì)的臨床實(shí)驗(yàn)室可進(jìn)行酶標(biāo)儀的自檢。