DNA提取常見問題（一）

核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在環境微生物檢測、食品安全檢測、輸血安全、法醫學鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學研究以及畜牧業等多種領域得到廣泛地應用。下面就讓小編帶你了解一下DNA提取的常見問題。

常見問題

1.加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來處理？

加進去的RNase本身是一種蛋白質，必須將其去除以便純化DNA，將SDS加入能夠使它們成為SDS-蛋白復合物沉淀，再將KAc加入，能夠使這些復合物轉變為溶解度更小的鉀鹽形式的SDS-蛋白質復合物，使沉淀更加完全。也能夠使用飽和酚、氯仿抽提再沉淀，將RNase去除。在溶液中，NaAc使用KAc代替，效果同樣比較好。

2.為什么在保存或抽提DNA過程中，一般采用TE緩沖液？

在基因操作實驗中，保持DNA的穩定性以及不會干擾緩沖液成分是選擇緩沖液的主要原則。盡管磷酸鹽緩沖系統（pKa=7.2）和硼酸系統（pKa=9.24）等均符合細胞內環境的生理范圍（pH），，能夠用作NA的保存液，然而在轉化實驗時，磷酸根離子的種類及數量將與Ca2+產生Ca3（PO4）2沉淀。在DNA反應時，不同的酶對輔助因子的種類及數量有著不同的要求，有的則要求低鹽濃度，有的要求高離子濃度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的緩沖系統，由于對于金屬離子的干擾作用不存在，ris-HCl系統大都用于DNA的提取或保存，而TE緩沖液中的EDTA能夠使得DNA的活性更加的穩定。

3.為什么用無水乙醇沉淀DNA？

實驗中Z常用的沉淀DNA的方法為使用無水乙醇來對DNA進行沉淀。能夠和水以任意比相混溶相混溶是乙醇的優點，與核酸不會起任何化學反應，對DNA很安全，所以其是理想的沉淀劑。DNA以水合狀態穩定存在即是DNA溶液，當將乙醇加入時，DNA周圍的水分子會被乙醇奪去，導致DNA失水而使聚合變得容易。通常實驗中，是將2倍體積的無水乙醇加入與DNA相混合，乙醇含量的Z終占比大約為67%。由于和95%乙醇相比較，無水乙醇的價格要昂貴的多，然而加95%的乙醇會增大總體積，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，所以也增加了DNA損失，特別多次使用乙醇沉淀時，就會對收得率產生影響。Z后的沉淀步驟要使用無水乙醇，初次沉淀DNA時使用95%乙醇為折中的做法。也能夠用0.6倍體積的異丙醇對DNA選擇性沉淀。通常在室溫下放置15-30分鐘就行。

4.在用乙醇沉淀DNA時，為什么一定要加NaAc或NaCl至Z終濃度達0.1~0.25mol/L？

在溶液pH大約為8時，DNA分子是帶負電荷的，將一定濃度的NaAc或NaCl加入，Na+會對DNA分子上的負電荷進行中和，從而使少DNA分子之間的同性電荷相斥力減少，使互相聚合形成DNA鈉鹽沉淀變得容易。當加入濃度過低的鹽溶液時，只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，如此會導致DNA沉淀不完全，，當加入的鹽溶液濃度太高時，也沒有很好的效果。在沉淀的DNA中，因為存在過多的鹽雜質，對DNA的酶切等反應產生影響，必須要進行洗滌或重沉淀。