紫外分析儀RFLP研究

紫外分析儀分為很多系列，有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列，不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長引進電泳分析、檢測，PCR產物檢測，DNA指紋圖譜分析，紙層分析或薄層分析等。

介紹

在DNA標記技術中，發展的Z早的即是RFLP標記。RFLP是指基因型之間限制性片段長度的不同，限制性酶切位點上堿基的插入、缺失、重排或點突變導致了這種差異。

自問世以來,RFLP（限制性內切酶片段長度多態性）作為di一代分子生物學標記在多門生物學科研究中得到了非常廣泛的應用，然而，其僅在近幾年才開始在植物抗性研究方面應用。

RFLP可以定位和分離植物的抗性基因。利用RFLP技術，對于核基因組或葉綠體基因組，特別是后者，如果可以對純凈DNA進行提取，那么其多態性就能夠從酶切后的電泳圖譜直接地看出。在污染環境下種群內、種群間不同水平的物種抗性分化進化水平上的差異能夠通過這一方法測定出來。RFLP技術不但能夠在基因型分型研究中使用，而且同樣能夠在不同環境中微生物多樣性的研究中使用。

基本類型

1、序列多態性

由于有較大部分的缺失、重復、插入等變異在DNA鏈內發生，盡管沒有改變其內切酶位點堿基序列，然而卻改變了原有的內切酶位點相對位置，從而引發了RFLP的出現。

2、點的多態性

DNA鏈中發生單個堿基的突變是其表現，并且一個新的酶切位點的形成或者一個原有酶切位點的丟失因為突變而造成。Southern雜交就能夠診斷。

特點

相比于核酸序列分析，RFLP能夠將序列分析中許多非常繁瑣工序省去，然而和RAPD比較來說，RFLP更加的耗費時間和精力，需要預先對DNA多種酶切、轉膜以及探針的制備等多個步驟進行操作，只鑒定基因組單拷貝序列。然而其能夠對多態性產生的突變類型是由堿基突變或倒位、 還是由缺失、插入造成的進行測定，也能夠被用于多態性是由父本還是母本產生的測定。

低拷貝編碼序列遍布于RFLP，并且穩定性非常高，然而RFLP實驗操作復雜，有著較為高昂的費用，以及比較長的檢測周期，對于大規模的分子育種不適用。在植物分子標記輔助育種中需要用PCR為基礎的標記替代RFLP。

主要步驟

1、提取DNA

2、DNA用限制性內切酶酶切

3、用凝膠電泳分開DNA片段

4、在濾膜上移入DNA片段

5、特定的DNA片段（Southern雜交）利用放射性標記的探針雜交來顯示和對結果進行分析。