制備液相色譜儀的分類

　　制備液相色譜儀是一種由儲液瓶、高壓泵、進樣系統、色譜柱、檢測器、廢液瓶六部分組成的儀器。按照色譜柱和樣品量的大小，分為：①低壓液相色譜儀;②中壓液相色譜儀;③高壓液相色譜儀;④快速液相色譜儀。低壓、中壓與高壓液相色譜儀的壓力范圍之間會存在一定交疊，沒有統一、明確的標準。

快速液相色譜儀

　　柱壓通常為2bar(或30psi)左右，對于那些容易分離的簡單混合物，由于快速液相色譜儀具有操作簡便、經濟等優點，常常是實驗室的shou選。但快速液相色譜儀不同于一般的層析分離，這種分離沒有壓力，而快速分離通常使用瓶裝氮氣加壓，使流動相具有一定的流速，從而縮短了分離時間。Still等人率先于1978年詳細研究了快速色譜，并于1981年獲得了ZL保護。

　　快速液相色譜儀使用的柱子一般是玻璃柱，柱直徑為3～10cm，長度為7～15cm。快速色譜中使用Z廣泛的固定相為硅膠。采用的粒徑通常為：25～40μm，40～63μm或63～200μm的球形固定相。其它如鍵合相、氧化鋁、聚酰胺吸附劑也常用作快速色譜的固定相使用。

低壓液相色譜儀

　　柱壓一般低于5bar(或75psi)。低壓液相色譜儀一般是由蠕動泵、進樣閥和檢測器組成，可以連續化，實現自動的梯度淋洗和餾分收集等操作。色譜柱管一般是玻璃或聚合物材料的，長度一般為240-440mm，內徑為10-40mm。

　　對于大多數在紫外區有吸收的物質，光學檢測器很常用。填料一般使用軟質的葡聚糖、瓊脂糖、纖維素、合成高聚物或離子交換劑，粒徑一般為40-60μm。

中壓液相色譜儀

　　柱壓在5-20bar(或75-300psi)之間，廣泛用于實驗室和工業規模的生物制品(如動物臟器提取液、濃縮液、體液、植物提取液、生物技術發酵液等--往往需要經過濾膜作初級凈化)的處理，以提取或純化所需的產品。

　　中壓液相色譜儀的主要部件為輸液泵、進樣閥、檢測器、餾分收集器等，比如瑞士公司的早期的中壓液相制備色譜，其輸液泵Zda流速可達156mL/min，并配有阻尼器，以保證液流的穩定;進樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管;檢測器有紫外和示差折光檢測器，流通池體積比較大，允許大流量流動相通過而無需分流;餾分收集器有原盤式和排式兩種，原盤式的接收管Z多達80個，而后者則更多;色譜柱內徑9-105mm，長度250-1760mm不等。

　　對于一般中壓液相色譜儀，當色譜柱直徑較大時，柱頭往往設計成錐形或有類似于傘狀的液流導向結構，使得當大量樣品進入到柱頭上時，能迅速地分散到整個柱橫截面上，及時被流動相沖走，避免了因樣品的局部過濃而引起柱超負荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯改性的多糖凝膠，聚合物微球，復合材料介質或硬質SiO2基體的化學鍵合相等，粒徑一般在25～40μm(Z常用的填料尺寸是15-25μm，25-40μm或40-63μm)，可采用濕法或干法裝柱。

高壓液相色譜儀

　　是指柱壓一般大于20bar(或300psi)的“高壓(或GX)液相色譜儀”，通常指所用色譜柱的塔板數大于2000，一般是在2000～20000的范圍之間。

　　當需要從大量的物質中分離純化不足1%的所需成分時，分離工作將會十分困難，往往在純化的Z后階段需要使用10μm或更小顆粒的GX填料。為獲得所需微量組分，可采用如下分離手段：制備型分離→半制備型分離→分析型分離→產物。為提高每次分離獲得純品的數量，制備型高壓液相色譜分離通常在超載情況下運行。

　　高壓液相色譜，即目前常用的GX液相色譜。色譜柱內填裝的是粒度范圍較窄的微小顆粒固定相(3～30μm)，為使流動相流出，需采用較高的壓力，同時系統的復雜性及成本亦增大，但分辨率可得到較大的提高。而填裝較大顆粒的固定相時，如中壓液相色譜系統，裝柱較容易，柱的通透性較高(只需較低的泵壓力)，可采用更大的色譜柱和更經濟的液相色譜儀，由此分辨率也較低。

用分析型高壓液相色譜儀進行制備型分離

　　當所需純化合物的量很少時(微克級至幾毫克)，可用分析型色譜柱進行多次分離。效果和利用大直徑色譜柱進行一次性分離相同。采用小直徑色譜柱時，可利用已有的分析型液相色譜儀，而無需在色譜柱、填料及附件方面投入更大資金;另外，還可在很大程度上避免由于放大所產生的問題，使分離速度加快。小直徑色譜柱的尺寸一般為250×4.6mm，通常裝有反相填料，每次可進樣5～100ug，通過多次進樣分離，可獲得足夠的純品。

　　經常需用分析型色譜柱進行分離的一個領域是對肽類化合物的純化。生物活性肽的含量通常很低，用分析型高壓液相色譜作為Z后的純化手段時，不會使色譜柱超載。

　　為了提高分離效率，可將分析型高壓液相色譜柱連接起來使用。此時可采用顆粒度在20～30μm的填料，以保持適當的通透性，尤其是當使用含水溶劑時。當使用己烷等有機溶劑時，由于流動相的粘度較低，可使用顆粒度為10μm的填料。然而由于分析型液相色譜儀無法提供大規模制備型分離所需的流速，其應用受到一定限制。