從母乳到配方奶粉，核苷酸的作用不可替代！嬰幼兒配方奶粉中5種核苷酸的檢測

二維固相萃取-液相色譜法測定

嬰幼兒配方奶粉中的核苷酸含量

稱取1g±0.005g樣品于50mL聚丙烯離心管中, 加入 20mL純水, 渦旋混合3min, 用10%乙酸水溶液調 pH到4.1, 8000r/min 高速離心3min, 將全部提取液轉移至25mL容量瓶里, 用一級純水定容至刻度線, 搖勻，待凈化。

取2.5mL凈化液加入ProElut Nucleotide(Cat.#: 65943)乳粉中核苷酸檢測專用柱(預先用3mL甲醇和3mL純水活化), 依次加入5mL 1%乙酸水溶液和5mL甲醇清洗, 棄去清洗液, 加入8mL 30%氨水甲醇溶液洗脫, 收集洗脫液, 將洗脫液在50℃減壓蒸干, 準確加入1mL流動相超聲溶解, 過0.22μm 水溶性濾膜, 待液相測定。

色譜柱: Spursil C18(250x4.6mm，5μm)(Cat.#: 82006); 

進樣量: 20μL

柱溫: 40℃

流速: 1.0mL/min

流動相: 磷酸鹽緩沖液(準確稱取1.360g磷酸二氫鉀和0.4753g四丁基硫酸氫銨, 加水溶解后, 定容到 1000mL):甲醇=96:4 (V:V)

檢測波長: 254nm

采用乙酸溶液調pH沉淀蛋白, 通過調節不同pH的比較, 發現pH在4.1±0.05時沉淀效果Z 好, 于是選擇將pH調節到4.1作為沉淀蛋白質Z 佳條件。

奶粉基質比較復雜, 采用C18和HLB凈化效果均不理想。實驗發現, 混合強陽離子固相萃取小柱對CMP和UMP保留較好; 混合弱陰離子固相萃取小柱對GMP、IMP、AMP 保留較好, 于是本研究將2種固相萃取模式結合起來, 采用復合模式ProElut Nucleotide(Cat.#: 65943)乳粉中核苷酸檢測專用柱進行凈化。

核苷酸是一類具有較強的極性和水溶性化合物, 迪馬 Spursil C18(250x4.6mm，5μm)(Cat.#: 82006)是一款碳載量較低、耐高比例水相的色譜柱, 適合于極性較強的物質的分離, 通過實驗發現該色譜柱對5種核苷酸有較好的分離保留。圖1~3分別為標準溶液、樣品、添加回收的色譜峰。