【色譜學堂】采用Quasar AQ超GX液相色譜柱進行華法林分析

華法林是目前世界上應用Z廣泛的抗凝劑，用于稀釋血液和預防血栓。早在上世紀20年代，人們意外發現美國的牛羊吃下發霉變質的三葉草后會出血致死。然而，在很長一段時間內，人們對導致出血的確切物質仍舊毫無頭緒。

經過對發霉的三葉草的數年研究，Z終從中提取了一種化合物，后來被稱作雙香豆素。據觀察，這種雙香豆素本身無法單獨作為抗凝劑。但一旦經過真菌代謝，雙香豆素就會表現出抗凝血特性，因此吃下發霉的三葉草才造成了牛羊出血不止。

經過進一步研究，從雙香豆素中合成了一種更有效的抗凝血劑?華法林。華法林Z早于1948年作為老鼠藥投入商用，隨后于1953年獲批應用于人類。

本應用簡報介紹了采用Quasar AQ液相色譜柱進行華法林分析，

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維生素 C，又稱抗壞血酸或 L-抗壞血酸，是一種水溶性維生素，存在于各種食物之中，包括辣椒、獼猴桃、橙子和羽衣甘藍等。人們認為，維生素 C 是預防壞血病的必需營養素，能夠參與人體組織修復，并且可以降低癌癥風險。它是多種酶作用所必需的物質，并且對免疫系統功能起到重要作用。維生素 C 于1928 年首次被分離出來， 之后成為shou個實現商業化生產的維生素。如今，維生素 C 被廣泛用作膳食補充劑。

本文簡要介紹了使用 Quasar 聯苯色譜柱對維生素 C（圖 1）進行的分析。

圖1. 維生素 C 的化學結構

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磺胺類藥物是人類史上diyi組人工合成的KJ藥物，用于預防人體細菌感染。百浪多息 (Prontosil)是世界上diyi種商品化的磺胺類藥 物，由拜耳公司(Bayer)的研究人員在 1932 年研制成功¹。接下來的幾年里，KJ藥物迅速發展，到了 20 世紀 40 年代，磺胺的應用已經十分廣泛。盡管此類藥物相對安全，但也經常引起皮疹、發燒和惡心等過敏反應。隨著低毒性衍生物的引入，尤其是青霉素的大規模生產，磺胺類藥物的使用量已經下降。

短效合成磺胺類藥物可有效抵抗多種病原微生物，現已廣泛用于獸醫學²。當與青霉素和金霉素聯合服用時，磺胺噻唑可顯著提高增重率，并改善飼料轉化率³。

本文簡要介紹了使用Quasar C18 GX液相色譜柱有效分離三種磺胺類藥物（圖 1）。

圖 1.磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶和磺胺甲惡唑的化學結構。

實驗條件

方法參數

所有GX液相色譜法的參數如表 1 所示。

表 1.GX液相色譜法的參數。

溶劑和樣品

所有溶劑均為GX液相色譜級的溶劑，并且所有樣品都采用 0.45μm 尼龍過濾器進行過濾。

結果和討論

使用 Quasar C18 色譜柱（長度：150 mm）成功分析磺胺類藥物（如圖 1 所示）只需 10 分鐘不到的時間，如 圖 2 所示。Quasar C18 的液相非常適合用來分析小分子（如上述抗生素），其采用Z佳配體鍵合過程來提供優異的表面覆蓋率。由此產生的高柱效提高了色譜柱的分離能力。因此，使用 Quasar C18 分離結構相似的化合物時，化合物的分離度將高于基線分離度。

圖 2.(i)磺胺噻唑、(ii)磺胺甲基嘧啶和(iii)磺胺甲惡唑的GX液相色譜分析圖。

結論

·Quasar C18 GX液相色譜的液相能夠GX分離這些早 期的KJ化合物；

·即便在分析堿性分析物（例如：本文所述磺胺類藥物）時，超高純度的二氧化硅基質和低殘留硅醇的活性也 能產生優異的峰形；

·Quasar C18 的液相采用Z佳配體鍵合過程，從而提供 優異的表面覆蓋率。由此產生的高柱效提高了分離結構相似的化合物的能力；

·當換成超GX液相色譜分析法，且使用裝填有 1.7 μm  顆粒的較短 Quasar C18 色譜柱時，所需的分析時間可 能會進一步縮短。

消耗品

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參考文獻

1.Oxford Handbook of Infectious Diseases and Microbiology.  OUP Oxford. 2009. p. 56. ISBN 9780191039621.

2.Bernd Mertschenk, Ferdinand Beck, Wolfgang Bauer  (2002). "Thiourea and Thiourea Derivatives". Ullmann's  Encyclopedia of Industrial Chemistry. Wiley-VCH.  doi:10.1002/14356007.a26_803.

3.3. Sulfathiazole (WHO Food Additives Series 25) http://www. inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v25je07.htm