Biochrom30+ 氨基酸分析儀氧化水解法檢測(cè)小雞配合飼

一、樣品前處理

1、              所用試劑

必須使用重蒸餾水或與之等質(zhì)的水（電導(dǎo)率＜10μs）

1、1            雙氧水,30%

1、2            甲酸，98-100%

1、3            苯酚：須重蒸

1、4            偏重亞硫酸鈉

1、5            氫氧化鈉

1、6            鹽酸，ρ＝1.18g/ml

1、7            水解劑：6mol/l 的HCL，1L含1g苯酚：

加1g苯酚（3.3）到492mL鹽酸(3.7)中，然后用水定容至1L

1、8            20種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

2、              標(biāo)樣配置

   氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取上述各氨基酸標(biāo)樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

  取氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)液。

3、              前處理設(shè)備

1)        天平

2)        水解管

3)        量筒

4)        無油真空泵

5)        干浴水解、濃縮儀

6)        移液管

7)        0.45um濾膜

4、                 樣品制備（參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC ）

1、              樣品的準(zhǔn)備

粉碎樣品，通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油（3.12）脫脂。

2、              氧化

從準(zhǔn)備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品，準(zhǔn)確到0.2mg，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮，水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過甲酸苯酚），用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小時(shí)。之后，從冰箱中取出，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來分解過量的氧化試劑。

3、              水解

 加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小時(shí)。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護(hù)眼罩）將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時(shí)。

4、              加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

    當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從烘箱中取出，并且打開瓶口（戴手套和護(hù)目鏡）。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實(shí)驗(yàn)燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。

轉(zhuǎn)移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測(cè)定或者放入冰箱等到分析的時(shí)候測(cè)定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1)        色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6′20cm

2)        分離程序：

3)        運(yùn)行時(shí)間：分析時(shí)間65min

4)        反應(yīng)單元溫度：135°C。

5)        檢測(cè)波長：570nm、440nm同時(shí)檢測(cè)。

三、外標(biāo)法定量

附、小雞配合飼料分析圖譜

一、樣品前處理

1、所用試劑

1.1  濃鹽酸，優(yōu)級(jí)純

1.2  6mol/L 鹽酸：濃鹽酸與水1:1混合

1.3  水：去離子水

1.4  苯酚：須重蒸

1.5  19種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

2、標(biāo)樣配置

氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：含有天冬氨酸、蘇氨酸等17種常見組成蛋白質(zhì)的氨基酸。

牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

璜基丙氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

蛋氨酸砜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

鳥氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

將17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、牛磺酸、正亮氨酸、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羥脯氨酸、鳥氨酸及PH2.2的檸檬酸緩沖液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)品待用。

3、前處理設(shè)備

1)     天平    

2)     水解管    

3)     量筒    

4)     無油真空泵    

5)     干浴水解、濃縮儀    

6)     移液管    

7)     0.45um濾膜    

4、樣品制備（參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC ）

1)樣品的準(zhǔn)備

粉碎樣品，通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油（3.12）脫脂。

2) 氧化

從準(zhǔn)備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品，準(zhǔn)確到0.2mg，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮，水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過甲酸苯酚），用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小時(shí)。之后，從冰箱中取出，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來分解過量的氧化試劑。

3）水解

加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小時(shí)。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護(hù)眼罩）將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時(shí)。

4)加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從烘箱中取出，并且打開瓶口（戴手套和護(hù)目鏡）。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實(shí)驗(yàn)燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。轉(zhuǎn)移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測(cè)定或者放入冰箱等到分析的時(shí)候測(cè)定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1)  色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6X20cm

2)  分離程序：

3)     運(yùn)行時(shí)間：分析時(shí)間65min

4)     反應(yīng)單元溫度：135°C。

5)     檢測(cè)波長：570nm、440nm同時(shí)檢測(cè)。

附、魚料分析圖譜及做樣結(jié)果

摘要：

       以海鱸魚為原料，使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)其肌肉的氨基酸組成進(jìn)行分析。結(jié)果表明海鱸魚肌肉中氨基酸總量的質(zhì)量百分比為20610.288mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的40.49%，鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.63%。

一、樣品前處理

       1、所用試劑

       1.1  濃鹽酸，濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純

       1.2 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。

       1.3  水：去離子水

       1.4   苯酚：須重蒸

       1.5  17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

       2、前處理設(shè)備

       1)分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g

       2)水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL

       3)勻漿機(jī)

       4)無油真空泵

       5)干浴水解濃縮儀

       6)移液管

       7)0.22um濾膜

       3、樣品制備（參考國標(biāo)GB 5009.124-2016）

       原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內(nèi)臟，采肉后清洗、瀝干，在勻漿機(jī)中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷凍保存，分析時(shí)取出解凍后使用。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

       氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

       1)色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6x20cm

       2)分離程序：

       附、圖譜及做樣結(jié)果

本文核心在于揭示氧化安定性測(cè)定儀的工作原理、檢測(cè)流程及數(shù)據(jù)解讀要點(diǎn)，幫助實(shí)驗(yàn)室在遵循標(biāo)準(zhǔn)的前提下獲取可靠的OSI值。通過系統(tǒng)化的檢測(cè)，可以對(duì)脂肪油脂及其他高脂樣品的耐氧化性能進(jìn)行定量評(píng)估，從而支撐原料選擇、配方優(yōu)化和保質(zhì)期預(yù)測(cè)。

氧化安定性測(cè)定儀通常采用Rancimat法，借助在高溫和持續(xù)空氣流下促進(jìn)樣品氧化，產(chǎn)生的揮發(fā)性酸隨風(fēng)帶入水相，導(dǎo)致水相電導(dǎo)率變化。儀器以電導(dǎo)率曲線為依據(jù)，自動(dòng)給出誘導(dǎo)期OS、以及在設(shè)定溫度和風(fēng)速下的OSI值。此法已被AOCS、ISO/EN等標(biāo)準(zhǔn)廣泛采用，成為評(píng)估油脂耐氧化性的主流方法。

具體檢測(cè)步驟包括樣品制備、儀器設(shè)置、運(yùn)行與數(shù)據(jù)采集、以及結(jié)果解讀。樣品常取油脂約3 g，確保無水分和雜質(zhì)；選定升溫（如90–110°C）及空氣流量，置入測(cè)定管并啟動(dòng)測(cè)試。測(cè)試過程中儀器持續(xù)記錄水相電導(dǎo)率，并在達(dá)到既定閾值時(shí)輸出OSI值。完成后對(duì)多次測(cè)定取平均，評(píng)估重復(fù)性。

檢測(cè)時(shí)需控制多種影響因素：樣品組成、抗氧化劑含量、水相純度、儀器校準(zhǔn)狀態(tài)、溫控與風(fēng)路穩(wěn)定性等。應(yīng)統(tǒng)一樣品量、避免水分進(jìn)入系統(tǒng)，定期維護(hù)傳感器和氣路，必要時(shí)以標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行方法驗(yàn)證，確保數(shù)據(jù)可比性。

應(yīng)用場(chǎng)景涵蓋食品油脂品質(zhì)控制、原料評(píng)估、配方開發(fā)及保質(zhì)期預(yù)測(cè)。通過對(duì)不同批次、不同處理?xiàng)l件的油脂進(jìn)行OSI比較，可快速評(píng)估抗氧化劑有效性、配方對(duì)氧化穩(wěn)定性的提升，以及儲(chǔ)存條件對(duì)穩(wěn)定性的影響。

日常維護(hù)應(yīng)包括清洗測(cè)定管、檢查氣路與溫控系統(tǒng)、定期更換耗材并記錄校準(zhǔn)日期。建立質(zhì)控程序，結(jié)合對(duì)照樣品進(jìn)行重復(fù)性評(píng)估，確保長期數(shù)據(jù)的可追溯性。綜上，遵循標(biāo)準(zhǔn)操作與科學(xué)解讀，氧化安定性測(cè)定儀為食品油脂耐氧化性評(píng)估提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

氨基酸分析儀新建序列修改

氨基酸分析儀是一種重要的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，用于檢測(cè)和分析樣品中的氨基酸組成。隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，分析儀的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，操作功能也越來越強(qiáng)大。在使用氨基酸分析儀時(shí)，研究人員有時(shí)需要對(duì)其預(yù)設(shè)的檢測(cè)序列進(jìn)行新建或修改，以滿足具體實(shí)驗(yàn)需求。

為什么需要新建或修改序列？

氨基酸分析儀通常配有預(yù)設(shè)的序列，能夠滿足大多數(shù)常規(guī)樣品的分析需求。某些特定的實(shí)驗(yàn)或復(fù)雜樣品可能需要不同的檢測(cè)時(shí)間、流速、洗脫劑等參數(shù)調(diào)整，預(yù)設(shè)的序列并不能完全滿足這些需求。此時(shí)，研究人員需要新建或修改分析序列，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。

例如，當(dāng)分析特殊的蛋白質(zhì)片段、天然產(chǎn)物或其他復(fù)雜樣本時(shí)，氨基酸的分離和檢測(cè)需要更為細(xì)致的控制。而通過新建或修改序列，用戶可以根據(jù)樣本的特性，設(shè)置的檢測(cè)條件，避免數(shù)據(jù)的偏差或不準(zhǔn)確。

如何進(jìn)行新建序列的步驟

1. 參數(shù)設(shè)置

新建序列的步是根據(jù)樣本特性設(shè)定關(guān)鍵參數(shù)。這包括氨基酸的分離條件、洗脫劑的使用、柱溫以及流速等。通常情況下，不同的氨基酸需要不同的流速和梯度條件才能實(shí)現(xiàn)分離。

2. 梯度程序的編寫

在氨基酸分析中，梯度洗脫法通常用于提高分離效果。新建序列時(shí)，用戶可以自定義梯度程序，通過設(shè)置洗脫劑的比例變化、流速的調(diào)整、時(shí)間段的劃分等，來實(shí)現(xiàn)不同氨基酸的有效分離。確保梯度程序的穩(wěn)定性和可控性，是獲得高質(zhì)量分析結(jié)果的關(guān)鍵。

3. 檢測(cè)順序的安排

新建序列時(shí)，用戶可以根據(jù)分析需求調(diào)整檢測(cè)順序，以優(yōu)化時(shí)間和效率。合理的檢測(cè)順序不僅能減少樣品損耗，還能提高儀器的使用效率。例如，將容易分離的氨基酸安排在前，減少檢測(cè)時(shí)間；而對(duì)于難分離的氨基酸，可以適當(dāng)延長檢測(cè)時(shí)間，提高分離度和檢測(cè)精度。

修改序列時(shí)的注意事項(xiàng)

1. 保持序列的邏輯一致性

修改序列時(shí)，必須確保所做的調(diào)整與整體分析流程相符。例如，在改變洗脫劑梯度時(shí)，必須考慮到檢測(cè)順序的影響，避免氨基酸出現(xiàn)重疊或分離不完全的問題。

2. 記錄和保存修改內(nèi)容

在分析儀中進(jìn)行任何序列的修改后，務(wù)必將新的序列保存并詳細(xì)記錄，以便將來參考或重復(fù)實(shí)驗(yàn)。通常情況下，分析儀會(huì)提供多個(gè)保存通道，允許用戶保存不同的序列版本，這有助于避免數(shù)據(jù)丟失或重復(fù)操作。

3. 定期校驗(yàn)和維護(hù)儀器

修改序列后，建議進(jìn)行一次儀器校驗(yàn)，確保新建或修改的序列在儀器上能夠正常運(yùn)行。儀器的狀態(tài)和維護(hù)情況也會(huì)直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此定期的維護(hù)和校準(zhǔn)十分必要。