義翹講堂《Elispot技術全景解讀：原理、操作要點及行業應用》

本文由 北京義翹神州科技股份有限公司 整理匯編

2026-01-21 15:44 16閱讀次數

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  目前，ELISPOT已被用于檢測藥物、化學制劑及其它CK復合物的特性及功能等方面,因此為體內免疫功能的調節效應提供了檢測依據。近幾年來,ELISPOT技術在腫瘤疫苗評價試驗、免疫監測及免疫學研究中越來越被廣泛地使用。在抗腫瘤免疫及相關領域中的應用在許多研究中,該技術已被用于免疫動物外周血淋巴細胞中抗原特異的細胞毒性T細胞（CTL）的數量檢測。近期,ELISPOT技術已用于分析和評價從傳染病病人的PBMC中檢測肽特異的T淋巴細胞以及在癌癥病人中誘導腫瘤特異的T細胞的疫苗試驗。ELISPOT檢測T細胞反應時敏感性、特異性和可重復性都很高,操作簡單迅速,需要少量標本,在檢測抗原特異性細胞數量的同時也反應其功能,并與臨床結果相關。ELISPOT平板可以提前大量準備,移液、洗板和讀板都可自動化,因而大批量檢查也可做到快速GX。在與與其他方法的比較后,ELISPOT很可能成為定量分析腫瘤或病毒特異性的T細胞反應的。在抗感染免疫中的應用CTL在抗病毒感染的免疫應答中占有主要地位,而CD4+輔助性T細胞亞群Th1/Th2的平衡在抵御病毒感染中起著同樣重要的作用。在HIV研究方面,由MHC-1類分子加工的不同抗原經CTL識別并產生免疫應答在控制HIV-1感染中同樣起重要作用。利用ELISPOT方法檢測CK如IFN2γ就可以進一步了解到針對HIV特異的CTL應答及相關免疫信息。此外,ELISPOT法還用于評價由HIV-1感染引起粘膜的CD4+T細胞免疫應答以及HIVgp120g與霍亂毒素共表達的DNA疫苗的免疫源性。在其他研究中,ELISPOT還用來檢測通過直腸免疫低劑量甲肝疫苗而產生的細胞免疫應答。在急性的自限性肝炎中,以Th1為主的應答促進細胞介導的免疫,且在控制病毒感染及延緩慢性疾病的發展方面有重要作用。在許多抗細菌免疫研究中,該方法也發揮了重要作用。例如：應用ELISPOT試驗證實表達大腸桿菌MalE蛋白的重組卡介苗（rBCG.MalE）誘導的T細胞應答是CD4+T細胞依賴的,rBCG.MalE誘導的特異CD4+T細胞應答存在Th1/Th2平衡轉換現象,并逐步形成Th1/Th2混合應答。細胞因子檢測技術的臨床應用目前，已經實現臨床檢驗的領域是對肺結核（TB）的檢測。而Z近的研究熱點就是對于移植的預測。受體對供體特異性HLA抗體一直以來都是器官移植的一大障礙,因為它們的存在不僅介導超急性排斥反應而且還可導致急性排斥反應。因此,HLA抗體的存在限制了異體抗原敏感患者對供體器官的需要,因而增加了等待移植的時間。在心臟,肝臟和腎臟異體移植后早期出現的并發癥如急性排斥反應與移植前存在的異體免疫臨床相關性迫切需要一種恰當的檢測方法在器官移植前能了解受體對供體特異性體液免疫的功能狀態。在接受移植的人群中，部分因有多次輸血、或既往有異體移植失敗或多次妊娠史體內曾經存在陽性異體抗體,在他們接受異體移植時,現有的檢測方法只能顯示他們對異體的免疫功能正常。但他們體內存在記憶B淋巴細胞,一旦受到相應HLA抗原的刺激則會喚起免疫反應,這不僅影響著移植的結果,甚至會出現危及患者生命的、與移植相關的并發癥。ELISPOT是一種強有效的檢測單個抗體分泌細胞的方法,具有很高的敏感性。因此,刺激記憶B淋巴細胞增殖、分化成漿細胞,并建立一種特異性ELISPOT方法檢測HLA抗體產生細胞是**手段。如果ELISPOT要進一步推廣應用，特別是臨床應用，其標準化將是一個十分重要的問題。美國FDA和NIH等已經開始建立ELISPOT的標準化流程，相信隨著ELISPOT技術的成熟、標準化程序的建立，它的應用將更加廣泛。[詳細]

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  2026-01-21 16:20

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  2026-01-29 09:09

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