凝膠成像系統校準規范

　　凝膠成像系統是一種采用成像裝置對置于暗箱內的核酸電泳凝膠、蛋白電泳凝膠進行成像，并將采集的圖像輸入計算機，通過相應的分析軟件，對凝膠條帶作定性和半定量分析的儀器。

凝膠成像系統校準原理

　　由于樣品在電泳凝膠上的遷移率不一樣，以標準品或者其他替代對照品作參照，根據未知待測樣品在圖譜中的位置可以估測其分子量大小，即定性分析。在一定濃度范圍內，灰度值(光密度)與樣品的一定濃度或一定質量成線性關系，根據未知樣品的灰度(光密度)，通過與已知濃度的標準品或替代對照品條帶的灰度(光密度)值相比較，就可以得到未知樣品的濃度或質量，即半定量分析。

凝膠成像系統計量特性

　　凝膠成像系統技術指標包括：分辨力、灰階等級、信噪比、白光照度、照度均勻性、紫外激發源光譜輻射相對分布率。

　　1、分辨力：能一定程度上反映所校凝膠成像系統成像的圖片清晰程度。

　　2、灰階等級：能反映所校凝膠成像系統的分辨圖像的明暗程度。

　　3、信噪比：可反映所校凝膠成像系統成像的圖片質量。

　　4、光照度和光照度不均勻率：能反映所校凝膠成像系統白光光源的照明質量。

　　5、紫外激發源光譜輻射相對分布率：能反映所校凝膠成像系統紫外激發源的紫外激發光譜分布。凝膠成像系統紫外激發源的紫外激發光譜是特指波長200nm~400nm的近紫外光譜，又可細分為UVA(320nm~400nm)、UVB(280nm~320nm)和UVC(200nm~280nm)3個波段，其中UVC(200nm~280nm)波段的紫外線易造成DNA鏈的斷裂和堿基的脫落，從而影響實驗結果的分析，所以應將UVC(200nm~280nm)波段占整個紫外激發光譜(200nm~400nm)的比例控制在一個較低的范圍內。

凝膠成像系統的校準設備

　　1、分辨力：ISO 12233分辨力測試圖卡。允許使用與該圖卡等效的分辨力測試圖卡。

　　2、灰階等級和信噪比：灰度級測試圖卡，符合GB/T9403-1988《反射式灰度級測試圖》要求。

　　3、光照度和光照度不均勻率：一級光照度計，測量范圍含0.1lx~199.9klx，相對示值誤差不超過±4%。

　　4、紫外激發源光譜輻射相對分布率：紫外激發源校準裝置，工作范圍包含200nm~400nm的光譜輻射計，波長示值誤差不超過1nm，讀數的有效位3位以上，探測部分的非線性誤差小于1%。

　　5、配圖像處理軟件的計算機：由于校準過程中需要讀取所拍攝圖片的有效像素、灰度值等，故需要配備圖像處理軟件的計算機。

凝膠成像系統校準方法

　　凝膠成像系統校準規范適用于對核酸電泳凝膠、蛋白電泳凝膠進行成像的凝膠成像系統的校準，其他類型的凝膠成像系統。

　　1、分辨力

　　凝膠成像系統校準時，可使用ISO 12233分辨力測試圖卡或其他等效的分辨力測試圖卡，以ISO 12233分辨力測試圖卡為例，因ISO 12233分辨力測試圖卡中有4種畫面比例，分別為1：1、4：3、3：2和16：9，故在校準過程中需要根據所校不同型號的凝膠成像系統，選取合適的畫面比例，使圖卡的有效高度(分辨力測試圖卡粗框內側的高度)正好占滿畫面，然后進行拍攝，拍攝圖像輸入計算機，用專用軟件測定拍攝圖像的有效像素。

　　2、灰階等級和信噪比

　　凝膠成像系統校準時，先以在無光源照射條件下。拍攝得到的圖像作為噪聲圖片;然后開啟白光光源預熱，待光源穩定后，將灰度級測試圖卡置于樣品臺上，使圖卡正好占滿畫面，進行拍攝，將拍攝得到的圖像作為灰階等級圖片。將兩組拍攝的圖片輸入計算機，使用專用軟件分別讀取噪聲圖片和灰階等級圖片的灰度值，應能分辨灰度級測試圖卡上的每個灰階等級，同時將能分辨的Zda灰度值作為潔凈圖片的灰度值，按信噪比公式計算信噪比。

　　3、光照度和光照度不均勻率

　　凝膠成像系統校準時，開啟白光光源，預熱，待光源穩定后，將光照度計探頭置于樣品臺各點，按照布點示意圖逐一測定照度，Z后取各點照度的平均值作為被校凝膠成像系統的光照度。并給公式計算光照度不均勻率。

　　4、紫外激發源光譜輻射相對分布率

　　凝膠成像系統校準時，開啟紫外激發源，預熱20min，分別讀取200nm~280nm范圍內的單波長輻射照度值和200nm~400nm范圍內的單波長輻射照度值。按公式分別計算200nm~280nm和200nm~400nm區域的積分光譜輻射照度值，Z后計算光譜輻射相對分布率。