PCR基因擴(kuò)增儀分類

按照DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，PCR儀被分為四種類型，分別是實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、原位PCR儀、梯度PCR儀以及普通PCR儀。

分類

實(shí)時(shí)熒光定量PCR基因擴(kuò)增儀

將計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)和熒光信號(hào)采集系統(tǒng)加入到普通PCR儀，叫做熒光定量PCR儀。其和普通PCR儀有著相同的PCR擴(kuò)增原理。只是其PCR擴(kuò)增時(shí)，利用同位素、熒光素等對(duì)加入的引物進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)然后輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)獲得量化的實(shí)時(shí)結(jié)果。 

熒光定量PCR儀包括單通道、雙通道和多通道。若僅使用一種熒光探針標(biāo)記，怎選用單通道，若有很多熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，就選擇多通道。多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物也能夠通過(guò)單通道檢測(cè)出來(lái)。由于一次只能夠?qū)⒁环N目的基因的擴(kuò)增量檢測(cè)出來(lái)，因此檢測(cè)完不同目的基因片段的量則需多次擴(kuò)增。其主要在醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè)、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等機(jī)構(gòu)使用。

原位PCR基因擴(kuò)增儀

被用來(lái)對(duì)細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀，被叫做原位PCR儀。例如目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置或者病源基因在細(xì)胞的位置等。細(xì)胞或組織保持完整，使得PCR反應(yīng)體系在組織和細(xì)胞中滲透，在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增，不僅能夠?qū)Π蠨NA檢測(cè)，還能將靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置標(biāo)出。其在臨床過(guò)程及病理的轉(zhuǎn)變和在分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理方面的實(shí)用價(jià)值非常重大。其在臨床、科研方面被應(yīng)用。

梯度PCR基因擴(kuò)增儀

一系列不同的退火溫度條件能夠通過(guò)一次性PCR擴(kuò)增進(jìn)行設(shè)置的PCR儀被叫做梯度PCR儀。由于被擴(kuò)增的DNA片段不同，其Z適合的退火溫度也不一樣，對(duì)一系列的梯度退火溫度進(jìn)行設(shè)置，從而一次性PCR擴(kuò)增，就能夠?qū)⒈磉_(dá)量高的Z適合的退火溫度篩選出來(lái)，進(jìn)行有效的擴(kuò)增。可以被用作對(duì)未知DNA退火溫度的擴(kuò)增進(jìn)行研究，如此不僅使成本得到節(jié)約，而且也使時(shí)間得到了節(jié)省。如果不設(shè)置梯度，那么梯度PCR儀也可以作為普通PCR擴(kuò)增使用。其主要在科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)使用。

普通PCR基因擴(kuò)增儀

一個(gè)特定退火溫度僅可以由一次PCR擴(kuò)增運(yùn)行PCR儀，指的就是普通PCR儀。若要做不同的退火溫度，那么需要運(yùn)行多次。其主作用要是擴(kuò)增目的基因退火溫度。該儀器在科學(xué)研究、教學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床、檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)得到廣泛地應(yīng)用。

PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

DNA擴(kuò)增量隨著PCR的三個(gè)反應(yīng)步驟的重復(fù)循環(huán)進(jìn)行而呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。實(shí)際反應(yīng)初期，靶序列DNA片段呈指數(shù)級(jí)增加，當(dāng)PCR產(chǎn)物的逐漸積累時(shí)，被擴(kuò)增的DNA片段不再呈指數(shù)增加，此時(shí)進(jìn)入線性增長(zhǎng)期或靜止期，使得平均效率達(dá)不到理論值。