PCR反應(yīng)五要素

對(duì)特定的DNA片段起到放大擴(kuò)增作用的一種分子生物學(xué)技術(shù)，被稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。其可以被當(dāng)作生物體外的特殊DNA復(fù)制，能夠大幅增加微量的DNA。1971年Khorana首先提出設(shè)想，1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)。

PCR反應(yīng)的五要素：

酶、引物(PCR引物為DNA片段，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈）、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）分別為參加PCR反應(yīng)的五種主要物質(zhì)。

引物

引物有多種設(shè)計(jì)方法，PCR在實(shí)驗(yàn)中的目的決定了引物的設(shè)計(jì)，然而基本原則是一樣的。

酶

PCR主要有兩種來源的酶可供使用，分別是Taq和Pfu，他們來源于兩種不同的噬熱菌。它們互有優(yōu)缺點(diǎn)，Pfu有糾錯(cuò)功能卻擴(kuò)增效率弱，Taq擴(kuò)增效率強(qiáng)卻但易發(fā)生錯(cuò)配。因此，在實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)于酶的選擇必須必須按照實(shí)際需要來決定。

模板

模板就是擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來源，然而其有兩個(gè)原則：一是其必須有很高的純度，再就是純度又不能過高防止起到Y(jié)Z作用。

緩沖液

緩沖液具有非常復(fù)雜的成分，緩沖液主要包括水、緩沖體系、一價(jià)陽離子、二價(jià)陽離子以及輔助成分。通常使用HEPES或MOPS緩沖體系。鉀離子是Z為常用的一價(jià)陽離子，然而在在特殊情況下也能使用銨根離子。二價(jià)陽離子就是鎂離子，按照反應(yīng)體系確定，沒有特殊情況發(fā)生無需調(diào)整。DMSO、甘油等為常見的輔助成分。它們主要起到保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結(jié)構(gòu)的作用。