飼料中的氨基酸檢測方法

飼料中的氨基酸檢測方法

儀器及試劑

儀 器

1). 天平一臺（精度0.1mg）；

2). 恒溫水浴鍋一臺；

3). 容量瓶；

4). 試管（1.5×15cm或1.5×10cm）；

5). 微量進(jìn)樣器（5ul或10μl）一支；

6). 微量可調(diào)移液槍（1000ul）一支、吸頭多個；

7). 旋渦混勻器一臺；

8). HPLC系統(tǒng)及氨基酸分析專用柱（4.6×250mm）；

試劑

1). 超純水（≥18MΩ?cm）；

2). 乙腈（HPLC級）；

3). 三水合醋酸鈉（分析純）；

4). 冰醋酸（分析純）；

5). 衍生試劑A和衍生試劑B溶液，至于冰箱保存（衍生試劑包對身體有害，用時請做好防護(hù)措施）；

6). 正己烷（HPLC級）。

二、樣品制備

準(zhǔn)確稱取飼料10-50 mg，置于25 ml塞比色管中，加1.0 mol/L鹽酸10 ml攪拌提取15 min，靜置10分鐘，將上清液過濾到100 ml量瓶中，殘渣加1.0 mol/L鹽酸10 ml攪拌3 min，重復(fù)提取兩次，合并上清液，收集濾液并加1.0 mol/L鹽酸定容至刻度，搖勻。

三、流動相的配制

流動相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.5）：乙睛＝93：7

配制方法：準(zhǔn)確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中，攪拌均勻，使之溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.5；準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml，混合均勻，抽濾過0.45μm濾膜；  

流動相B：水：乙腈＝20：80

配制方法：準(zhǔn)確量取水100ml和乙腈400ml，混合均勻，抽濾過0.45μm濾膜；