- 2025-11-14 10:48:34美國貝克曼庫爾特 CytoFLEX SRT桌面型流式細胞分選儀
- 果您需要簡單易用的儀器來分選多個細胞群,從而獲得下游實驗所需的目標細胞,那么 CytoFLEX SRT桌面型流式細胞分選儀無疑是很棒的選擇,因為它上手快且操作方便。
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細胞分選儀問答
- 2025-01-13 17:45:14自動細胞接種儀使用方法有哪些?
- 自動細胞接種儀使用方法:提升實驗效率與精確度 在現代生物學和醫學研究中,細胞培養技術是實驗室工作的核心之一。而自動細胞接種儀作為一種高效的實驗工具,已被廣泛應用于細胞培養過程中,極大地提升了實驗效率和準確性。本篇文章將詳細介紹自動細胞接種儀的使用方法、注意事項以及其在實際應用中的優勢,幫助廣大科研人員更好地掌握其操作技巧,提高實驗結果的可靠性。 一、自動細胞接種儀的基本原理 自動細胞接種儀通過機械化、自動化的方式來實現細胞的接種。其原理是通過設定好細胞接種的時間、數量、培養皿規格等參數,儀器自動將細胞液均勻地分配到各個培養皿中。這一過程不僅大大節省了實驗人員的時間,還能有效避免人為操作誤差,提高細胞接種的均勻性與重復性。自動細胞接種儀主要通過吸取細胞懸液、精確計量并將其精確分配到培養皿內,確保每次接種的細胞數目和分布更加均勻。 二、自動細胞接種儀的使用步驟 準備工作 在使用自動細胞接種儀之前,實驗人員應首先準備好所需的培養皿、細胞懸液和培養基。確保儀器的各個部件清潔,避免交叉污染。還需檢查儀器的設置,確認設備已連接電源并啟動。 設置參數 自動細胞接種儀的操作界面一般為觸摸屏,用戶可以根據實驗要求設置細胞接種的相關參數。這些參數包括每個培養皿中的接種細胞數、接種的細胞量(通常以細胞數或細胞密度為單位)、每次接種的時間間隔等。 接種操作 設置完參數后,啟動儀器進行接種操作。儀器會自動吸取細胞懸液,通過設定的吸管或分配裝置,將細胞均勻接種到各個培養皿中。在整個過程中,儀器會實時監控接種的進度,并根據設置的程序進行調整。 結束與清潔 接種完成后,儀器會發出提示音,通知用戶操作結束。接著,用戶可以取出已接種的培養皿,放入適宜的培養環境中進行孵育。儀器的各個部分需要按照規定進行清潔和消毒,以避免細胞殘留物的堆積。 三、自動細胞接種儀的優勢 提高實驗效率 自動細胞接種儀能顯著減少人工操作時間,提高工作效率。尤其是在大規模細胞培養時,儀器能夠快速、地完成接種任務,節省大量的人工成本。 減少人為誤差 人為操作往往會導致細胞接種不均勻或細胞數量偏差。使用自動細胞接種儀后,接種過程可以嚴格按照設定的參數進行,減少了操作中的不確定性和誤差,保證了實驗結果的可靠性。 提高接種精度 自動細胞接種儀能夠精確控制細胞接種的數量和分布,尤其適用于需要高度精確的實驗,如高通量篩選、藥物測試等領域。儀器的高精度控制確保每個培養皿中的細胞數目均勻,避免了因細胞數量不一致而影響實驗結果的情況。 四、使用自動細胞接種儀的注意事項 定期保養與維護 自動細胞接種儀的長期穩定運行需要定期進行維護。用戶應根據設備手冊的要求,對儀器進行定期清潔、校準和檢修,確保儀器的性與穩定性。 注意環境控制 盡管自動細胞接種儀可以減少人為因素的干擾,但細胞培養環境的控制依然至關重要。接種前,應確保培養環境無污染,接種后及時將培養皿放入適宜的溫度、濕度和二氧化碳濃度環境中進行培養。 操作人員培訓 盡管自動細胞接種儀具有較高的自動化程度,但操作人員仍需接受專業培訓,熟悉儀器的操作流程、參數設置及注意事項,以確保設備的高效運轉和實驗的成功。 結語 自動細胞接種儀為現代細胞培養提供了、高效的解決方案,已成為生物學、醫學研究以及藥物開發中的重要工具。通過合理的參數設置和正確的操作方法,科研人員能夠更好地提升實驗的效率與精度。掌握其使用方法,不僅能降低人工操作的風險,還能為細胞培養實驗帶來更加可控和可靠的結果。
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- 2022-03-01 10:17:17新品搶先試 用 | 納米磁珠細胞分選 ,Get最方便的細胞分選方法!
- 提到細胞分選實驗,大家首先想到就是流式細胞分選,該方法使用熒光抗體標記單細胞懸液,再通過調節合適的電壓、補償等,可以將目的細胞與非目的細胞區分開來。由于可以對多參數、不同熒光強度的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,流式分選技術在同時進行多標記的細胞分選時,其地位無可替代。但是當需要快速獲得某種分選后的細胞時,流式分選的操作較為復雜,且花費的時間過長,對細胞的刺激也比較大。因此,使用免疫納米磁珠進行快速細胞分選的方法應運而生,該方法不僅對細胞刺激性小、速度快,而且操作簡單,稍等片刻就可快速獲得目的細胞。(▲瑞沃德細胞分選新品)新品來襲,自主研發瑞沃德細胞分選產品包括自主研發的磁珠分選試劑盒和細胞分選柱,能在短時間內通過簡單、快速的操作分選得到高純度、高活率的目標細胞。使用流程同時,納米級別磁珠無需洗脫,分選得到的細胞可直接應用于流式分析、細胞培養、單細胞測序等下游實驗。結果展示純度*注:小鼠脾 臟細胞樣本CD3分選后純度流式檢測結果,A為分選后陰性管(流出組分),B為分選后陽性管(滯留組分)。Marker激活情況注:小鼠脾 臟細胞樣本CD3分選后激活Marker CD69檢測結果,A為分選后Day0檢測結果,B為分選后用CD3/CD28單抗激活Day3檢測結果應用場景多,助力科學研究免疫學研究腫瘤學研究神經生物學研究干細胞研究細胞治療四大特點,輕松獲取目標細胞1、可獲得高純度,高活率,高得率的目的細胞2、獲得細胞可直接用于細胞培養,測序等下游實驗3、溫和,低刺激,不改變細胞原本生物學特性4、高效便捷,操作簡單新品上市開啟免費試 用活動小鼠CD3+/ CD4+/ CD8+三種細胞分選試劑盒按需任選,助您更好地細胞分選識別下方二維碼,快來申請免費試 用
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- 2023-08-18 11:00:43如何分辨“真“、”假”全自動細胞計數儀?
- // 上一篇《給大家推薦一種細胞計數儀性能檢測的方法》中,我們發現全自動細胞計數儀檢測細胞樣品的重復性和梯度稀釋的結果準確性上,都比半自動插板式細胞計數儀更有優勢。那么大家可能會問:“導致這樣的性能差異原因是什么呢?另外,目前市場上都自詡所賣的細胞計數儀是全自動的,那我們如何區分哪個是‘真’,哪個又是‘假’的呢?”要回答這2個問題,首先我們需要對圖像法細胞計數的過程做下回顧。下面是圖像法臺盼藍染色細胞計數和活率分析的基本流程。01細胞吹打混懸后定量吸取樣品02等體積吸取臺盼藍吹打染色03染色好的細胞加到血球計數板或細胞計數板上04顯微鏡下手動或自動統計死活細胞數,然后計算活細胞密度和活率05清洗血球計數板或更換新的細胞計數板傳統顯微鏡下手工細胞計數,以上5步操作都要操作人員來完成。這種方法因為人為操作帶來的誤差,導致結果差異有時會很大,甚至超出通常可以接受的±10%偏差范圍。并且隨著樣品數越多,操作人員會逐漸造成眼疲勞,無法繼續進行有效并準確地計數。手工顯微鏡法細胞計數的照片和計算方法插板式半自動細胞計數儀的出現,省去了操作人員肉眼統計和分析死活細胞數的步驟,儀器操作只需要將樣品混勻、定量染色和上樣分析(有時要手動對焦),測試結束后更換新的細胞計數板做下一個樣品。用于半自動細胞計數儀的各類細胞計數板移液槍加樣的照片半自動細胞計數儀的缺點在于:由于每塊細胞計數板的檢測樣品數量有限,所以檢測新的樣品需要更換新的板子。但板子批次間存在差異,樣品和臺盼藍體積需要手動定量,取樣量少代表性差(從30-50mL樣品中一般就只吸取20uL樣品),染色后的細胞樣品通過移液槍加樣有時還產生氣泡而報廢,用后廢棄的細胞計數板會產生二次污染物,這些目前都還沒有好的處理方法。那有沒可能細胞的混勻和染色,以及細胞的計數和分析過程全部實現自動化,同時不用手動更換新的細胞計數板而自動做下一個樣品呢?答案是使用全自動細胞計數和活率分析儀。全自動細胞計數儀相比半自動插板式細胞計數儀的優勢點小結:01全自動吹打混懸和臺盼藍染色全自動細胞計數儀的一個顯著特點是:能夠自動完成細胞的吹打混懸和臺盼藍染色。要實現全自動吸取等體積的細胞樣品和臺盼藍染料,首先需要由儀器內部的步進馬達精確地完成加樣體積的控制。其次,因為可以全自動吸取樣品,所以全自動細胞計數儀會有1個轉盤或孔板放置其他待測樣品。對于排在后面的細胞若發生沉降,就需要在測試前對樣品進行吹打混懸,以防止細胞沉降導致測試結果出現偏差。而這2步操作,半自動細胞計數儀都只能通過手動來完成,從而引入人為操作誤差。同時,Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀單個樣品檢測的取樣體積200±20uL,加樣體積不需要很準確,儀器自動會完成定量取樣。相比半自動細胞計數儀只有10-50uL的取樣體積,而且由手動操作完成。取樣體積大代表性更好,測試結果更容易接近真實值。02動態百圖分析Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀測試細胞樣品,單個樣品拍攝的照片達到了100張,分析的細胞數量更多,1x10e6個/mL的細胞懸液拍攝100張照片的細胞數差不多2600個。單個樣品檢測拍攝的細胞數越多,檢測結果的系統誤差越小,測試結果的重復性和準確性也相應更高。其中1張照片(上左圖)和100張照片的分析柱狀圖03高通量和不間斷檢測全自動細胞計數儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測,即待測樣品可以先放到轉盤或96孔板上,根據軟件中設置好的分析條件,儀器會自動按要求完成細胞的計數和活率分析。Vi-CELL BLU全自動細胞計數和活率分析儀一次最多可以放21個樣品(使用24位轉盤)或96個樣品(使用96孔板)進行分析測試。若使用24位轉盤,在檢測過程中還可以實現不間斷上樣測試,即樣品測試過程中,還可以放入新的待測樣品。綜上所述,全自動細胞計數儀在細胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差,同時百圖分析拍攝的細胞數多,結果代表性更好。所以,在細胞計數方面重復性和準確性上相比半自動插板式細胞計數儀更有優勢。同時,全自動細胞計數儀的高通量和不間斷檢測功能,又滿足實驗室樣品量大,不同老師共用該儀器的檢測需求。并且每個樣品測試結束后,儀器會自動進行管路清洗,儀器本身還帶有自動過夜清洗功能,使得儀器一直處于待機狀態。所以,在操作便捷性上,全自動細胞計數儀也勝過半自動插板式細胞計數儀。以上這些特點可以用于區分我們使用的細胞計數儀是“全自動”還是“半自動”,同時也是為何全自動細胞計數儀性能上要優于半自動的地方。希望大家可以通過這些方法來分辨“真”、“假”全自動細胞計數儀。
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- 2023-06-09 11:41:52人人都是流式高手:Tumor-infiltrating lymphocytes(TILs) 分選秘籍
- Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) 是指浸潤腫瘤組織的淋巴細胞。淋巴細胞是免疫系統中的重要組成部分,負責識別和攻擊異常細胞,包括癌細胞。流式細胞術對TILs的分選提供了一個重要的工具,用于表征、純化和研究浸潤腫瘤的免疫細胞群。它有助于研究人員了解TILs的組成、功能和潛在的治 療相關性,推動我們對腫瘤與免疫相互作用的理解。我們使用流式細胞術來分選TILs主要應用場景如下:01、鑒定和表征:流式細胞術允許我們根據TILs表面標記物的特征來鑒定和表征不同的亞群。通過使用針對CD3、CD4、CD8和其他免疫細胞標記物的特異性抗體來標記細胞,我們可以區分和定量TILs中的各種T細胞亞群。這有助于我們了解腫瘤微環境中TILs的組成和多樣性。02、特定TIL亞群的純化:流式細胞術分選使我們能夠分離和純化感興趣的特定TIL亞群。通過基于表面標記物的表達,對細胞進行分選和篩選,我們可以收集純凈的TIL亞群用于進一步的下游應用。這使研究人員能夠研究特定的TIL亞群,并研究其功能特性或基因表達譜。03、功能分析:分選后的TILs可用于功能性分析,以評估其免疫活性和功能。例如,可以測試分選后的TILs的增殖能力、細胞因子產生、對腫瘤細胞的細胞毒性或其他功能性實驗。這些分析提供了有關TIL亞群功能能力和潛在抗腫瘤免疫反應的見解。04、基因組學或蛋白質組學分析:流式細胞術分選可以獲得純凈的TIL細胞群,進而進行基因組學或蛋白質組學分析。通過分析分選TILs的基因表達或蛋白質譜,研究人員可以更深入地了解與TILs在腫瘤免疫中相關的分子機制和信號通路。然而不同于外周血、脾 臟中的淋巴細胞,TILs的流式檢測存在更多的不確定性,需要有效優化包括樣本處理、配色方案、上樣條件以及分析方法等實驗設計的各個方面,才能實現更為準確、真實的多色復雜樣本流式檢測。圖1為外周血來源樣本淋巴細胞分型的流式檢測數據,由圖可見,淋巴細胞群體T、B細胞分群明顯,T細胞亞群也可清晰區分。另外,我們也可以看到,該數據以FSC通道設定閾值,其閾值設定值較低,導致碎片及噪音信號干擾明顯,不過由于血液樣本碎片較少,與細胞分群明顯,故而對最 終結果的影響并不大。圖1 血液樣本淋巴細胞免疫分型流式數據然而,當我們使用同樣的模板檢測腫瘤組織樣本時,數據就出現了明顯問題。實體瘤組織細胞構成復雜,并且在將組織樣本制備成單細胞樣本的過程中會產生大量的細胞碎片,這些雜質細胞及碎片會對流式檢測造成顯著的干擾。如圖2所示,T細胞中出現了大量CD19和CD3雙陽性細胞,不符合已有文獻報道的結果。這些雙陽性細胞主要是由于雜質細胞及碎片的非特異干擾導致的。這些干擾對于流式檢測及流式分選的準確性有很大影響,甚至會導致得出錯誤的結論。圖2 浸潤腫瘤組織的淋巴細胞免疫分型流式數據那么,基于以上數據,我們應該如何優化實驗設計以提高浸潤腫瘤組織的淋巴細胞分選的準確性呢?這里給大家以下幾點建議:01、增加Pan-Marker檢測:這里的Pan-Marker是指目標細胞群均表達,但其他細胞群體及碎片不表達的表面標記。CD45廣泛表達于免疫系統的各個細胞亞群上,但在非免疫細胞上沒有表達或表達很低。因此,在檢測淋巴細胞等免疫細胞時,可通過檢測CD45是否表達來區分免疫細胞及非免疫細胞,以達到排除雜質細胞干擾的目的。02、優化樣本制備方案:對復雜樣本來講,樣本制備方案是否合適決定了流式實驗的成功率。可根據文獻報道并通過預實驗來選擇最 佳的消化酶配方和消化時間,在確保細胞得率的同時盡量減少雜質干擾并最 大限度的保存細胞活性及功能。此外,選擇合適的細胞分離手段進行目的細胞的富集。例如,若針對淋巴細胞檢測,利用Ficoll或Percoll密度梯度離心法富集單個核細胞,可有效去除脂肪、碎片及雜質細胞的干擾。03、進行Fc封閉:組織浸潤的多種細胞,特別是單核/巨噬細胞以及DC細胞高表達抗體Fc端的受體。這些細胞在進行流式抗體標記時,即使不表達相關抗原,也可通過Fc受體非特異性的結合流式抗體的Fc端,從而導致非特異信號。要解決這一問題,可購買商業化Fc封閉試劑,在標記流式抗體前進行Fc封閉即可。04、合理設定閾值:閾值的設定與實驗目的息息相關。在流式分析實驗中,應當設定閾值去除絕大部分噪音及碎片信號,僅保留少量碎片信號即可。在流式分選實驗中,若分選所得細胞用于培養,同樣應當設定閾值去除絕大部分噪音及碎片信號,僅保留少量碎片信號,這樣做可以有效提高分選效率及回收率;但若分選所得細胞用于qPCR、測序,特別是單細胞測序等基因組學應用,由于碎片中含有一定量的核酸片段乃至細胞核碎片,在分選過程中就需要將盡可能多的碎片與目的細胞區分,因此應當設定較低的閾值以暴露足量的碎片信號讓分選儀器檢測到,進而有效確保分選所得目的細胞不摻雜核酸碎片,以免影響后續實驗準確性。05、利用空白熒光通道排除非特異:什么是空白熒光通道呢?舉一個例子,我們設計一個3色實驗標記FITC、PE、PE-Cy7三種染料,沒有標記APC,在檢測時APC通道就是空白通道,是不應該有陽性信號的。復雜樣本中的部分雜質細胞有較強的非特異熒光信號,通常這些非特異的熒光信號在所有的流式熒光通道中均可檢測到。基于這一原理,我們可在上樣時預留一到兩個空白熒光通道,樣本中的目的細胞沒有標記這些空通道的熒光素,在這些通道里面是陰性的,而雜質細胞的非特異信號在空白通道中通常也是陽性的,我們就可以通過設門選擇空白通道中的陰性細胞來達到去除非特異信號的目的。需要注意的是,利用這一方法時要充分考慮補償的影響,最 好選擇與已用通道補償小或無補償的通道作為空白通道。06、增加細胞死活染料:死細胞的非特異性地結合會增加假陽性。死細胞會產生自發熒光干擾特定信號的檢測。在TILs分選中去除死細胞。可以增加數據準確性:死亡的細胞可能會釋放細胞碎片和細胞內成分,這可能會干擾實驗結果,引入假陽性或假陰性結果。通過去除死細胞,可以提高分選結果的準確性和可靠性。并且為分選后TILs細胞活力提供保證:分選到活細胞可以保證后續實驗的有效性和可靠性。死亡細胞不具備正常的生物活性和功能,因此分選到活細胞可以確保后續實驗能夠反映真實的細胞生物學狀態。圖3 無死細胞排除處理的樣本分析比較圖4 有死細胞排除處理的樣本分析比較復蘇后的PBMC在免疫染色之前不添加(圖 3)或者添加ViaKrome 405可固定活性染料(55℃,10分鐘)(圖 4)。然后,使用Perfix-nc細胞染色試劑盒(型號 B10825)處理細胞,并用Granzyme B-FITC、CD19-PE、CD14-ECD、CD79a-PC5.5、CD3-PC7 和 CD45- Krome Orange 進行染色。 數據統計信息顯示:兩個不同條件下,門內細胞在上一門級百分比也不一樣,充分展示了消除死細胞以后的數據效果。
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- 2023-07-03 11:42:58人人都是流式高手:GFP分選,這還有我不會的?
- 很常見的場景如下:細胞轉染后,想用流式檢測表達GFP細胞的百分比并且分選,但是不同的設門方法讓GFP陽性細胞百分比看起來有差異,究竟下面哪種策略才適合呢?今天我們主要討論一下FSC和SSC上設門對GFP陽性細胞百分比的影響。讓我們一個一個設門,把每種情況具體看一下。保持FITC通道上的門不變,我們來看一下在前向和側向的散點圖上設門在不同的位置,代表你選擇了什么類型的細胞。只有P1賦予了藍色,其他門的顏色去掉,這樣,我們就可以很方便的看出來細胞群在不同的圖上所處的位置。第 一種設門,除了左下角靠近0的碎片不圈,其他基本都圈上,從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來有單個細胞也有粘連細胞,P2門下 GFP陽性細胞百分比為61.36%。第二種設門,只圈最密集的這一群,從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來,這部分的細胞基本都是單個的,P2門下 GFP陽性細胞百分比為65.39%,較第 一種高。第三種設門,密集細胞群左邊的和左下角靠近0的碎片不圈,只圈右邊的這兩群,從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來有單個細胞也有粘連細胞,P2門下 GFP陽性細胞百分比為65.70%,較第 一種高,和第二種差不多,但是稍微高一點。這樣分析下來,大家最 大的困惑是這三群細胞要不要圈,怎么圈才是最 好的?讓我們在第 一張FSC和SSC的散點圖上根據細胞群設三個門。三個門分別為P1、P4和P5,顯示了三種不同的細胞群。P1顯示為單個細胞,FITC通道上陽性細胞比例為65.54%。P4顯示大部分為粘連的細胞,因此在FITC通道上的陽性細胞比例為71.43%,較P1細胞群高,如果分析時加入這群細胞會增加GFP陽性細胞百分比。如果在單克隆分選中選擇這群,會導致雖然篩選到陽性細胞,但是單克隆源性降低。P5顯示為單個細胞,但是因為FSC較P1小,考慮是細胞狀態不好細胞呈現皺縮導致,所以其在FITC通道上的陽性細胞比例為20.15%,較P1細胞群低的多,如果分析時加入這群細胞則會降低GFP陽性細胞百分比。如果加入7AAD染料,這群會呈現出陽性,所以在分選中這群細胞不該圈選,或者在去除死細胞的門中去除。由此可見,如果只想要分析狀態好的單個細胞的GFP陽性百分比,那你可以選擇P1門的設門方式,當然也可以把P1和P4都選上,再用SSC-A和SSC-H去掉粘連細胞對數據的干擾。練習題如果您在細胞轉染后,流式檢測表達mCherry細胞的百分比時發現,mCherry通道細胞群并沒有呈現明顯分開的兩群(由于細胞在mCherry通道有較高的自發熒光),要怎么確定mCherry細胞百分比并且分選呢?
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