- 2025-01-21 09:32:41實時無標記
- 實時無標記是一種檢測技術，它能在不添加任何標記物的情況下，實時監測細胞、微粒或其他生物樣本的動態變化。這種技術通過監測樣本的物理特性（如大小、形態、折射率等）來實現實時監測，廣泛應用于細胞培養、藥物篩選、微粒分析等領域。實時無標記技術具有非侵入性、高通量、實時監測等優點，是科學研究中不可或缺的重要工具。
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- Agilent xCELLigence RTCA DP實時無標記細胞分析儀
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- Agilent xCELLigence RTCA MP實時無標記細胞分析儀
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- Agilent xCELLigence RTCA SP 實時無標記細胞分析儀
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- Agilent xCELLigence RTCA S16實時無標記細胞分析儀
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清砥量子科學儀器（北京）有限公司
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實時無標記問答
- 2021-09-23 14:35:340.2ML透明8聯排實時熒光定量PCR管蓋,無熱源
- 0.2ML透明8聯排實時熒光定量PCR管蓋,無熱源本生(天津)健康科技有限公司供應：移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養皿全系熒光定量PCR耗材，產品包括：PCR單管、PCR八聯管、96孔板、384孔板。貨號：23-P001-T 23-P002-T 產品描述：0.2ML 8聯排實時熒光定量PCR管+蓋，平蓋 無DNA/RNA酶 無熱源 透明 0.2ML 8聯排實時熒光定量PCR管+蓋，平蓋 無DNA/RNA酶 無熱源 白色 規格： 125 條/盒, 10盒/箱 0.2ML透明8聯排實時熒光定量PCR管蓋,無熱源產品介紹：>超清潔生產環境下用優質生物聚丙烯生產>管壁薄，壁厚均勻，傳熱效率快，樣品加熱均勻>專業的透明管體超亮光學平面制造工藝，保證側檢測器的檢測透光性>與PCR儀器的傳熱槽配合良好，便于傳熱>獨特設計，適度適配8條熒光定量PCR管帽，有效防止樣品蒸發>高精度模具制造和精密塑料成型工藝，確保產品質量和批間產品的均勻性/穩定性。>0.1毫升8條管體正面刻字標記，便于樣品識別/區分 一次性稱量皿Weighing Boats中號 接種針滅菌 125ml 過濾裝置 圓盤混勻儀 滾軸混勻儀 Tip 100-1300ul, 加長吸嘴,藍色,袋裝 自立試管 50ml 離心管,PP(聚丙烯), 錐底, 黃色蓋,支架 50ml 離心管,PP(聚丙烯), 錐底, 粉色蓋 50ml 離心管,PP(聚丙烯), 錐底, 黃色蓋 超速離心管45ml,不帶帽,滅菌 50ml自立試管,印刷標記區 30ml自立試管 10ml自立試管,,印刷標記區 1.70ml微量離心管,滅菌小包裝 60*15mm細胞培養皿,懸浮培養 60*15mm細胞培養皿,貼壁培養 T-25,50ml細胞培養瓶 T-75, 250ml細胞培養瓶,密封蓋 T-25,50ml細胞培養瓶,透氣濾膜蓋 T-75, 250ml細胞培養瓶,密封蓋 250ml培養瓶，平底，100%生物降解材料，單個滅菌包裝 150*15mm細胞培養皿，貼壁培養，標準，滅菌 細胞培養板帶蓋(6孔,12孔,24孔,48孔,96孔)無菌包裝 0.1-10ul盒裝滅菌加長型透明吸頭96支/10*5/ 0.1-10μl透明加長斜尖滅菌吸頭96個/10盒/5 Western 孵育盒 6分格 黑色
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- 2022-07-22 15:27:25熒光定量PCR實驗，熒光標記怎么選？
- 熒光定量PCR技術是將常規的PCR和熒光檢測技術相結合，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，以此實現對初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術作為當今生物學研究的重要手段之一，在基礎科學、生物技術、醫學研究、法醫學、診斷學等多方面具有廣泛的應用前景。說到熒光定量PCR技術，我們經常會問類似于“你的實驗是染料法還是探針法”，“你用的探針是什么類型”等之類的問題，這其實是對熒光標記的選擇。根據熒光標記的不同，可以將熒光定量PCR實驗分為探針法和染料法兩大類。染料法染料法利用能與DNA雙鏈結合的染料來實現，如SYBR Green I。該染料在游離狀態下呈現微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA的雙螺旋小溝結合，其綠色熒光增強約1000倍。因此其總的熒光強度與雙鏈DNA含量成正比，利用這一關系可以反映生成的PCR產物的量（圖 1）。SYBR Green I的吸收約在497 nm，發射波長約在520 nm，與FAM熒光分子的光譜性質類似，因此在所有的熒光定量PCR設備中都是通道檢測，即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 圖1 染料法原理圖理論上，所有能與雙鏈DNA結合的染料都可以用于qPCR檢測，如溴化乙錠EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而選擇用于qPCR反應的染料通常會從信號強度、生物安全性、檢測簡便性和經濟適用性這幾個因素考慮。例如EtBr可能存在潛在的致癌性。綜合考慮下來，SYBR Green I成了比較理想的選擇。目前，使用Evagreen的實驗者也越來越多，Evagreen作為一種新型的染料，其光譜性質與SYBR Green I類似，其優勢在于：? 對PCR反應的抑制程度小。高濃度SYBR Green I會強烈抑制PCR反應，因此要控制其使用濃度，一定程度上降低了DNA檢測的靈敏度。? 與DNA結合密度高。單位長度的DNA雙鏈上Evagreen的密度更高，為飽和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高檢測靈敏度的同時也可用于高分辨率溶解曲線HRM。? 化學性質更穩定，適合長期保存。TaqMan 探針TaqMan 探針基本可以滿足60%以上的qPCR實驗，如常規的基因表達和拷貝數變異CNV實驗。TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團連接在探針的5'末端，而淬滅劑則在3'末端（圖2）。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收; PCR擴增時, Tag酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。常用的熒光基團是FAM，TET，VIC，HEX。▲ 圖2 Taqman探針MGB探針對于要分辨單堿基差異的SNP實驗，采用對堿基錯配容忍度更低的MGB探針，在淬滅基團后加入了DPI3基團（圖3），從而提高了與靶標結合的親和力；而且可以對靶點堿基進行化學修飾，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 圖3 MGB探針雙雜交探針Taqman探針對探針的長度有比較嚴格的要求，雙雜交探針則消除了這一“缺陷”。雙雜交探針是由兩條寡核苷酸單鏈組成，一條的3’端帶有供體熒光分子，另一條的5’端帶有受體熒光分子（圖4）。游離狀態下熒光供體會發出熒光，但當兩條單鏈都匹配到模板鏈上時，就會發生熒光共振能量轉移FRET，受體熒光分子就可以發出熒光，其熒光強度與生成的產物的量成正比。雙雜交探針的優勢有兩點：擺脫了探針長度的限制，較長的探針可以提高與模板匹配的成功率；只有上下游兩條探針都正確匹配后才能檢測到受體熒光分子發出的熒光，特異性有所提高。▲ 圖4 雙雜交探針分子信標探針游離狀態下，分子信標探針是一種莖環結構，其環狀部分的15-30個堿基可以與靶標區域相結合匹配，下端的配對區域（左右一般各5-6個堿基）則由重復的GC組成，從而將5’的熒光分子和3’的淬滅基團緊緊聚在一起，熒光發生淬滅；當退火時，分子信標探針解開環并與模板靶標雜交，這樣熒光分子和淬滅基團的物理距離就變大了，熒光淬滅的前提就打破了（圖5）。除了MGB探針，分子信標探針也非常適合用于SNP檢測。▲ 圖5 分子信標探針除了上述幾種類型的探針之外，還有嘗試將引物和探針功能相結合的技術，如Amplifluor、LUX等，在設計難度上有所提高，但使用時更簡便。各有其應用的側重點和設計上的利弊，在此不多贅述。那么在熒光定量PCR實驗中，我們應該如何進行選擇呢？在這里，給大家總結了一些兩種方法的區別，供大家參考。表1 染料法和探針法的區別
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- 2023-01-12 17:17:57Ramina 應用實例｜實時監測細胞培養性能測試
- 前言拉曼光譜在復雜水體系中反映組分微小變化的能力深化了該技術在生物制藥過程分析（如生物反應器中的細胞生長）方面的應用。拉曼光譜儀技術可以實時、原位和無損地監測生物制藥生產過程，可用于復雜化學體系的連續過程監測。拉曼光譜技術在生物反應過程中可檢測大量代謝物變化的能力已將該技術提升為強大的過程分析工具。實驗概述拉曼光譜分析光學探頭具有可重復使用的特點，通過減少運行間的可變性來提高過程監測的可重復性和可靠性。Thermo Scientific? Ramina? 過程分析儀可匹配多個光纖探頭。MarqMetrix 生物反應器球形探頭是專為滿足生物工藝工業的要求而設計的，可以搭載到 Ramina 過程分析儀上使用。這些探頭具有快速、易于更換和連接以及耐用等特點，可以進行無菌處理，比如離線的高壓滅菌。DynaDrive 一次性生物反應器(S.U.B.)是 S.U.B. 技術的最 新產品，為大規模生物生產提供了更好的性能，并具備可擴展性。與傳統的 S.U.B. 設計相比，長方體的罐體具有幾個關鍵優勢，包括優越的混合和傳質能力以及更好的可擴展性。本應用介紹了Ramina過程分析儀系統與 500L HyPerforma DynaDrive 生物反應器的集成，并實現關鍵過程參數(CPPs)的在線測量，通過采集整個細胞生長培養過程中連續生成的光譜數據建立起若干參數和代謝物的精確預測模型。材料與方法細胞培養和喂養策略細胞培養在500L HyPerforma DynaDrive S.U.B 中進行（見下圖1），其中包含體積約為320L細胞培養基，在36.5℃，pH=6.9+/-0.3, DO=50%的條件下接種0.5x106個細胞/mL。體系的 pH 值通過添加二氧化碳氣體和碳酸鈉來控制。細胞在化學定義的培養基中生長，從第3天開始每天進行兩步喂養過程。第 一種喂養介質以起始體積的重量為4%添加，第二種喂養介質以0.4%添加。第6天體系溫度轉為33°C。試驗在14天后終止。生物反應器避光處理以防止雜散光干擾。在高壓滅菌后，將 Ramina 過程分析儀生物反應器球形探頭插入HyPerforma DynaDrive S.U.B. 中，進行在線實時拉曼光譜數據采集。圖1.500L Thermo Scientific HyPerforma DynaDrive S.U.B. 細胞培養罐Ramina 過程分析儀測試使用 Ramina 過程分析儀進行數據采集（見下圖2）， Ramina 過程分析儀的生物反應器球形探頭直接浸入在生物反應器(500L) 中，每平均20次測量獲取一張拉曼光譜數據，積分/曝光時間為3秒，激光功率設置為450mW。每個數據光譜的總采集時間為2分鐘，在 Ramina 過程分析儀用以建立模型數據與離線儀器分析通過匹配時間戳以確認。圖2.Thermo Scientific? Ramina? 在線拉曼分析儀化學計量學模型建立來自多臺 Ramina 過程分析儀、探頭和生物反應器的數據被用于創建模型。訓練數據集從每個生物反應器的45個樣本中收集，以創建每個化學計量學模型。對光譜數據進行了檢查，剔除了由宇宙射線引起的異常譜峰。選擇感興趣的光譜區域，并對光譜進行預處理，以去除基線干擾并優化信噪比。建模過程中測試了許多預處理技術，包括Savitzky Golay濾波、自動Whitaker平滑、多元散射校正、SNV和均值中心化。根據建模的關注點選擇優化不同的預處理技術。為每個感興趣的組分創立偏最小二乘(PLS)模型并進行交叉驗證以測試每個模型的優化的效果。這些組分包括葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺、谷氨酸、TCD、VCD和其他在生物反應器培養過程中產生的常見代謝物。結果在這項工作中，在線拉曼光譜儀應用于連續分批補料 CHO 細胞培養過程。使用拉曼光譜監測工藝參數首先需要使用外部校準數據集（獨立離線數據）建立化學計量學模型，通過對感興趣的參數的離線分析數據和對應的在線拉曼光譜數據的關聯關系建立模型。
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- 2022-06-06 14:14:13如何處理實時熒光定量PCR數據
- 實時熒光定量PCR數據中的基本概念：在整個擴增過程中會出現基線期，指數期，線性期和平臺期。其中在基線期和指數增長期，擴增產物都是以指數級增長，但是在基線期我們沒辦法檢測；而到了線性期和平臺期之后，由于不同基因，或者不同條件下其擴增效率差別很大，因此沒有辦法計算模板的含量。因此，在指數增長期的CT值就成了計算模板含量的關鍵值。▲ 圖一：線性圖譜▲ 圖二：對數圖譜為什么知道CT值就能夠得到最初的目標基因含量呢？如圖三，表示一個基因單次擴增曲線。N為擴增產物的分子數，模板的分子數乘以1+擴增效率的n次方，n代表循環次數。也就是說，如果擴增效率為100%，產物的分子數就等于模板數乘以2的n次方。但是在線性增長期和平臺期，擴增效率不可能是100%，因此PCR理論方程只在指數期成立，也就是圖三綠色框的部分。▲ 圖三數據處理：以下三張圖分別表示我們在做熒光定量PCR時提到的三個名稱：擴增曲線、標準曲線、溶解曲線。1、juedui定量：使用一系列稀釋的已知濃度的標準品與未知樣本同時進行測定，根據系列濃度標準品的CT值與起始模板量之間的線性比例關系。注意事項：? 標準品必須來源可靠，濃度已知。? 標準品要和待測樣品同時在儀器中擴增。? 只能根據標準品覆蓋的濃度范圍進行待測樣本濃度的推測。2、相對定量：是用來確定經過不同處理的樣品之間的表達差異或目標在不同時相差的表達差異，也就是倍數差異。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統來自美國Azure Biosystems公司，以創新服務于生命科學為愿景。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統融合了高品質Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸的光學檢測系統，為您的科學研究提供高精準、高靈敏的可靠結果。Azure Cielo 3/6檢測通道，可根據實驗需求靈活配置。同時配有10.3觸控系統，主機本身可獨立運行、連接、遠程交互，讓您隨時隨地知悉實驗進程和及時獲得實驗結果。
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