GB 31657.10-2025，迪馬助力蜂產品中磺胺類藥物及抗菌增效劑殘留量的測定

蜂產品(蜂蜜、蜂王漿等)作為天然營養滋補品，因富含活性成分而備受消費者青睞，其質量安全直接關系人體健康與行業可持續發展。磺胺類藥物(如磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑等)及抗菌增效劑(如甲氧芐啶)因抗菌譜廣、價格低廉，曾被廣泛用于蜂群疾病防治，以降低蜂群感染風險、保障蜂蜜產量。然而，此類藥物在蜂體內代謝緩慢，易通過攝食、分泌等過程殘留于蜂產品中，長期攝入含殘留的蜂產品可能導致人體腸道菌群失調、過敏反應，甚至誘導細菌耐藥性，對免疫力較弱的兒童、老人等群體構成潛在健康威脅。

為規范蜂產品市場秩序、保障消費者權益，全球多個國家和地區已對蜂產品中磺胺類藥物及抗菌增效劑殘留制定嚴格限量標準。例如，我國GB 2763-2021《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》明確規定了蜂產品中多種磺胺類藥物的聯合殘留限量；歐盟、美國等也通過相應法規設定了嚴苛的殘留控制指標，成為蜂產品國際貿易中的重要質量門檻。

準確、靈敏的殘留檢測方法是落實限量標準、開展質量監管的核心技術支撐。蜂產品基質復雜，含有大量糖類、蛋白質、黃酮類等干擾物質，且磺胺類藥物及抗菌增效劑殘留水平通常較低(μg/kg 級)，對檢測方法的分離凈化能力、靈敏度及特異性提出了極高要求。目前，相關檢測技術已從傳統的比色法、薄層色譜法，逐步發展為高效液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法(HPLC-MS/MS)等現代分析技術，其中HPLC-MS/MS因兼具高分離效率與高定性定量準確性，成為復雜基質中痕量藥物殘留檢測的主流手段。GB 31657.10-2025《食品安全國家標準 蜂產品中磺胺類藥物及抗菌增效劑殘留量的測定》作為2025年實施的蜂產品獸藥殘留檢測新標準，其制定和出臺是基于蜂產品質量安全監管需求、舊標準局限性以及國際檢測技術發展等多重背景。

迪馬科技參考GB 31657.10-2025重現了此方法，在此基礎上優化了分析條件和蜂蜜樣品的提取過程，使用我司色譜柱Leapsil C18，100x2.1mm，2.7μm (Cat.#:86005)進行測定，蜂蜜樣品使用PSA、C18凈化，蜂王漿樣品使用PMR凈化，基質匹配標準溶液進行計算，添加水平為1μg/kg的蜂蜜樣品加標回收率可做到64%-104%，添加水平為10μg/kg的蜂蜜樣品加標回收率可做到63%-104%；添加水平為10μg/kg的蜂王漿樣品加標回收率可做到77%-114%，添加水平為100μg/kg的蜂王漿樣品加標回收率可做到75%-113%，符合標準要求。

本方案適用蜂蜜和蜂王漿中磺胺類藥物及抗菌增效劑殘留量檢測，蜂蜜定量限為1μg/kg，蜂王漿定量限為10μg/kg。

(1) 磺胺及抗菌增效劑混合標準儲備液：100μg/mL磺胺混合標準儲備液（Cat.#:48846）由迪馬科技標準品部提供。

(2) 磺胺及抗菌增效劑混合標準中間液Ⅰ：準確吸取適量混合標準儲備液，用10%乙腈配制成磺胺及抗菌增效劑混合標準中間液，濃度為1.0μg/mL。

(3) 磺胺及抗菌增效劑混合標準中間液Ⅱ：準確吸取適量混合標準儲備液，用10%乙腈配制成磺胺及抗菌增效劑混合標準中間液，濃度為100ng/mL。

蜂蜜：

(1) 稱取5g樣品于50mL塑料離心管中；

(2) 向離心管中加入5mL 0.1%甲酸溶液，渦旋混勻；

(3) 向離心管中加入10mL乙腈，振蕩5min；

(4) 再向離心管中加入1g氯化鈉和4g無水硫酸鈉，渦旋1min；

(5) 8000rmp離心5min；

(6) 移取上清至另一個離心管中，向殘渣和剩余液體中加入10mL乙腈，渦旋1min，8000rmp離心5min，合并上清液。

蜂王漿：

(1) 稱取1g樣品于50mL塑料離心管中；

(2) 向離心管中加入2mL水，渦旋混勻；

(3) 再向離心管中加入8mL乙腈，振蕩10min；

(4) 8000rmp離心5min；

(5) 移取上清至另一個離心管中，備用。

蜂蜜：吸取全部備用液于50mL離心管中，加入PSA 50mg、C18 150mg、無水硫酸鈉900mg，渦旋1min，8000rmp離心5min，取上層清液4mL于40℃水浴氮氣吹干，殘余物中加入10%乙腈溶液1mL，充分溶解，經0.22μm尼龍濾膜過濾（Cat.#:37177），待測定。

蜂王漿：吸取全部備用液過600mg/6mL PMR固相萃取柱（Cat.#:65990），收集流出液，取流出液1mL于40℃水浴氮氣吹干，殘余物中加入10%乙腈溶液2mL，充分溶解，經0.22μL尼龍濾膜過濾（Cat.#:37177），待測定。

注：同方法制備基質匹配標準溶液。

UPLC條件

色譜柱：Leapsil C18，100×2.1mm，2.7μm  (Cat.#:86005)

流速：0.3mL/min

進樣量：5μL

柱溫：35℃

流動相：A:0.5%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸甲醇

梯度設置:

質譜條件

電離模式：ESI

掃描方式：正離子掃描

檢測方式：多反應監測

電噴霧電壓：5500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi 

離子源溫度：500℃

精密量取混合標準工作液適量，分別加入經提取、凈化、氮吹后的蜂王漿空白試料殘渣中，40℃水浴氮吹干殘余液體，加入2mL 10%乙腈，渦旋溶解殘余物，配制成濃度為0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的基質匹配標準工作溶液，0.22μm尼龍濾膜過濾。

1. 蜂蜜選用市場中比較常見的某品牌洋槐蜂蜜作為樣品，重現標準，經過大量重復性實驗測得磺胺脒加標回收率50%-55%，提取損失高達30%。磺胺脒是一種強極性化合物，蜂蜜不同于蜂王漿，是一個均質、連續、高粘度糖相，因此蜂蜜對磺胺脒的保留以高強度、高密度的氫鍵結合為主，提取損失較大。采取10mL乙腈提取2次的方法，可以使磺胺脒回收率穩定在60%以上，達到標準要求60%-110%。

2. 為了提高部分目標物的響應值，對液相方法進行了優化，不同于國標，本方法提高了流動相中的甲酸含量并調整了梯度程序。