液相色譜柱的柱長及內徑要怎么選擇？

        液相色譜柱是由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成。柱管的材質有很多，比如聚合物、玻璃、不銹鋼等。但是建議柱管用不銹鋼材質，因為不銹鋼這種金屬耐高壓、耐腐蝕且硬度高，相比于玻璃等材質不易摔壞。不過當壓力不高于70Kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管。對于液相色譜柱柱管內壁要求有很高的光潔度，不銹鋼柱內壁會經過多次拋光，這是為提高柱效，減小管壁效應。恒譜生0.1μm高光潔度色譜柱柱管能夠快速分析的同時保持超高的柱效；使用壽命長，不僅能夠減少頻繁更換色譜柱帶來的重新進行方法驗證、條件摸索等工作，還大大的降低了使用成本；具備優(yōu)良的選擇性和分離能力。

        除了拋光，也有在不銹鋼柱內壁涂敷氟塑料來提高內壁的光潔度，其效果與拋光是相同的。色譜柱兩端的柱頭內裝有篩板，通常是不銹鋼和peek材質制作的，根據需求選擇與色譜柱匹配的柱篩板，孔徑取決于填料粒度，目的是防止填料漏出。

        柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定，目的是為了避免管壁效應。

　　液相色譜柱的柱長及內徑的選擇原則是什么？長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實驗室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質的復雜樣品程序升溫分析。

　　內徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內徑越小柱效越高，但內徑越大，柱容量也增加，允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時，則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡，將會導致色譜峰畸變，柱分辨率降低，重現性不好。因此對于復雜樣品需要準確分離，必須使用小內徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內徑大的柱子，目前實驗室使用常見的柱子內徑一般是4.6mm。

        分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。恒譜生液相色譜柱內徑有2.1、3.0、4.6、10mm可供選擇，不銹鋼材質不易因為磕碰損壞柱管。

         以上就是一些關于液相色譜柱柱長及內徑的選擇原則，供大家參考。 深圳市恒譜生科學儀器有限公司是致力于研發(fā)制造高質量色譜耗材的高科技生產廠家，我們在UHPLC超高壓在線過濾器、色譜保護柱、液相色譜柱、色譜填料、鬼峰捕集柱、無氣泡高凈化能力的溶劑濾頭、0.1μ高光內表粗糙度柱管等領域具有多年的生產經驗和較強大的制造能力。

        恒譜生科學儀器的戰(zhàn)略合作伙伴客戶遍布化工、制藥、生物、YL、食品、材料、環(huán)保、農業(yè)、檢驗、科學研究等行業(yè)。我們的產品長期出口到歐洲、美國、日本、俄羅斯、加拿大、澳大利亞、東南亞等對本行業(yè)產品有著高質量要求的制藥、化工科學發(fā)達經濟體。我們期待與客戶們建立更加緊密的戰(zhàn)略合作關系，攜手共創(chuàng)美好未來！

 在液相色譜上遇到的問題有很多，例如HPLC 色譜柱的一些常見問題時有出現，可能會令很多實驗員感到非常沮喪。那么今天，恒譜生帶您了解這些是什么以及如何解決它們可以讓您避免數小時的挫敗感。

一、無峰值：

       可能有多種因素會導致 HPLC 輸出中不出現峰或出現非常小的峰。正常讀數應該又大又細的峰值，高度也是會有不一樣的。小峰或沒峰可能代表檢測器燈已關閉，沒有流動相流量和樣品丟失或變質，或者檢測器、積分器、進樣器閥或記錄器這些有問題存在。

     其實先要確保探測器是打開狀態(tài)，然后檢查所有連接情況。確保自動進樣器樣品瓶中有足夠的液體和樣品中無氣泡情況出現，并使用新的標液重新進行系統(tǒng)的檢查。

二、無流量：

       如果沒有出峰，很有可能是HPLC 色譜柱中沒有流量；也可能意味著泵已關閉或流量因某種原因中斷或受阻；同時泵頭中也可能存在泄漏或空氣滯留。

       如果泵關閉，需要啟動泵并檢查儲液器中的流動相液位和整個系統(tǒng)的流量情況。檢查樣品環(huán)是否有其他障礙物或氣塞，并確保流動相組分可混溶且流動相是否能夠進行正常脫氣。繼續(xù)檢查系統(tǒng)松動情況，檢查泵是否有泄漏等其他問題。

三、壓力問題：

      要是壓力低于平常或無壓力這有可能是系統(tǒng)某處發(fā)生泄漏或空氣滯留；要是系統(tǒng)壓力過高，那么泵、進樣器、在線過濾器、保護柱、分析柱或管路都可能有問題。

      如果是檢查發(fā)現是低壓，那就要檢查整個色譜系統(tǒng)是否存在泄漏、泵密封件故障或閥門損壞的情況等。如果是高壓的話，先從移除保護柱和分析柱，并用接頭替換，將進樣器重新連接到檢測器。以 2-5 mL/min 的速度運行泵，并開始查找原因，。如果問題是出現在分析柱上，請在分析柱與檢測器斷開連接時反轉，并沖洗色譜分析柱；在必要的時候更換入口濾芯或更換柱子。

四、裂峰：

       如果發(fā)現峰出現在中間下降形成M形，那么可能是分析柱入口可能存在一些污染；也可能在色譜柱入口處有篩板被堵塞了或存在了不均勻的空隙；還有可能是樣品溶劑與流動相不相容。

       如果是入口處有污染，請反轉并沖洗色譜柱，并在需要時更換篩板。還可以用具有相同鍵合相功能的薄膜顆粒重新填充色譜柱頂部，并繼續(xù)以反向流動方向使用色譜柱；如果是問題出在樣品上，請調整流動相中的樣品，因為樣品和流動相中的 pH 值差異會導致分峰。

五、尾峰和前峰：

       發(fā)現峰不是直線上升和下降，而是開始在前面或后面就形成輕微的傾斜，則稱為前端或尾部。這通常可能是保護柱或分析柱受損或是色譜柱過載。如果有拖尾峰，請先移除保護柱并嘗試分析，必要時就需要更換。如果需要恢復或更換分析柱。一定要檢查流動相的組成和色譜柱的性能。有前峰的話，請嘗試注入更小的體積或稀釋樣品；如果溶劑有問題請調整溶劑，并使用 50 柱體積的 HPLC 級乙酸乙酯以標準流速的兩倍或三倍沖洗極性鍵合相柱，然后在開始分析之前使用中等極性溶劑。

       今天恒譜生分享的知識先到這啦，希望對您的工作有所幫助！