透射電鏡制樣

　　透射電鏡全稱透射電子顯微鏡，是一種高分辨率、高放大倍數的顯微鏡，是材料科學研究的重要手段，能提供極微細材料的組織結構、晶體結構和化學成分等方面的信息。

透射電鏡制樣流程

　　組織取材(60s內)，體積<1mm³，之后進行如下步驟：

　　1、前固定：3%戊二醛2h或過夜。

　　2、漂洗：磷酸緩沖液，3次，10min/次。

　　3、后固定：1%鋨酸固定液，2h。

　　4、漂洗：磷酸緩沖液，3次，10min/次。

　　5、梯度脫水：50%丙酮，70%丙酮，80%丙酮，90%丙酮兩次，各10min。1**%丙酮兩次，各15min。

　　6、滲透：丙酮/包埋劑(1：1、1：2)，室溫各1h。丙酮/包埋劑1：3，4度過夜。純包埋劑，4度過夜。

　　7、包埋：純包埋劑(37度、45度、60度各24h)。取出包埋塊，進行超薄切片，片厚70nm。分別采用醋酸雙氧鈾對切片進行染色30min，雙蒸水漂洗3-5次，之后用檸檬酸鉛染色10min，雙蒸水漂洗3-5次。待切片干燥后，透射電鏡觀察。

透射電鏡樣品更換方法

　　一、樣品桿插入步驟：

　　1、更換前一定要觀察銀屏diyi頁，檢查樣品桿位置是否在ZX位置;

　　2、確認燈絲處于關閉狀態!

　　3、使用樣品桿上的引導釘(guide pin)對齊樣品插口，然后插入到樣品桿停下后(此時不可松手!)，等待響聲直至樣品桿被吸住，再將“PUMP/AIR”開關打至“PUMP”一側，松手靜候(一般超過10min)。

　　4、等角度計(goniometer)的綠燈亮后，屏幕P3頁顯示P4值接近30，順時針輕轉插入一段后，等待V2和V5B均打開后再順時針輕轉繼續插入直到終止，注意整個過程吸力很大，一定要拉緊樣品桿，使之慢慢進入。

　　5、插入完畢后一定要等goniometer的綠燈亮，檢查P3頁的P4值，P4值應該≤30，閥2打開，右側下方SIP真空在10^-5級，并指針指向中間方可打開燈絲進行觀察。

　　6、整個插入樣品桿的過程中，切勿大幅度搖動樣品桿，整個過程要輕、緩慢地進行;人體的任何地方都不可接觸樣品桿O環到樣品桿頂端位置。

　　二、樣品桿拔出步驟：

　　1、關閉透射電鏡燈絲電流;

　　2、用觀察窗左側“SPEC CONTROLLER”控制面板上的N鍵復原樣品桿位置到原點附近(注意在沒有插入樣品桿時，嚴禁使用“N”鍵!)或用控制球復原;確認樣品位置“specimen position”為原點：=0，0，0，tilt X，y=0;

　　3、將Goniometer的“pump/Air”打倒“Air”一側;

　　4、輕輕將透射電鏡樣品桿往外拉，拉一段后，會感覺到拉不動，此時稍稍停頓后逆時針輕輕轉動一小角度后，再往外拉，很短的距離后，會又拉不動，此時再逆時針輕輕轉動一小角度，停頓一會會聽到兩聲閥門啟動的聲音，然后會感覺到樣品桿沒有吸引力了，再輕輕拔出樣品桿;

　　5、整個過程中，拉動樣品桿要沿著goniometer的軸拉動，不能大幅度搖晃，而且手要一直握住樣品桿。整個過程要輕、緩慢地進行;人體的任何地方都不可接觸樣品桿O環到樣品桿頂端位置。

　　三、樣品在樣品桿上更換步驟：

　　1、要把透射電鏡樣品桿放在樣品桿架上;

　　2、用專門工具一手將樣品銅網支撐金屬片固定夾抬起，另一手用大捏子夾住銅網支撐金屬片，把金屬片放到旁邊支架，螺絲孔對準支架上的螺絲;

　　3、用專用螺絲批輕輕擰松2個固定螺絲(不要擰下來，只要擰松即可);

　　4、輕輕移開固定銅網的彈片(小心損壞銅網);

　　5、用專用捏子輕輕取出銅網，放上新銅網;

　　6、重新將固定銅網彈片蓋上銅網(注意觀察位置，如不對，則要進行調整);

　　7、用擰緊螺絲固定彈片，一手用專用工具抬起樣品架上的固定夾，一手用大捏子將金屬片放到固定夾正確位置上，放下固定夾。