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Altura 超高惰性色譜柱賦能生物分子質譜分析新高度

在分析科學中，實現生物分子的可靠色譜分離一直是一項挑戰。科學家通常采用親水相互作用色譜 (HILIC) 檢測和分離酸性代謝物（例如含有多個磷酸或羧酸基團的代謝物）。

安捷倫科技（中國）有限公司更新于：2025-11-18

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在分析科學中，實現生物分子的可靠色譜分離一直是一項挑戰。科學家通常采用親水相互作用色譜 (HILIC) 檢測和分離酸性代謝物（例如含有多個磷酸或羧酸基團的代謝物）。在分析磷酸肽、磷酸化多糖、單克隆抗體和藥物化合時，各種固定相（包括反相、離子交換和體積排阻）普遍存在信號抑制與峰形不佳的情況。這些現象通常與色譜柱及系統硬件金屬表面的相互作用有關。

超高惰性技術的 Agilent Altura HPLC 柱是一款帶涂層的不銹鋼 (SS) 柱，其惰性涂層可阻止分析物與金屬表面的相互作用，同時仍保持了不銹鋼柱硬件的強度、穩定及耐高壓優勢。

實驗部分

樣品

極性代謝物包括有機酸（即谷氨酰胺、谷氨酸和蘋果酸）

和磷酸化核苷酸（例如 AMP、ADP 和 ATP）

磷酸肽樣品（序列信息及磷酸化殘基位點詳見表 1

表 1. 本研究中使用的磷酸肽的序列。(pS) 表示磷酸化絲氨酸，(pY) 表示磷酸化酪氨酸

標識符	序列
a	SFVLNPTNIGM(pS)KSSQGHVTK
b	FQ(pS)EEQQQTEDELQDK
c	TRDIYETD(pY)YRK
d	TRDI(pY)ETD(pY)(pY)RK

儀器和色譜柱：

色譜柱：

采用超高惰性技術的 Agilent Altura HILIC-Z 色譜柱， 2.1 × 150 mm, 2.7 μm （部件號 227215-924）

儀器和參數：

LC/MS 分析采用以下儀器配置：

Agilent 1290 Infinity II 生物高速泵 (G7132A)

Agilent 1290 Infinity II Bio Multisampler，配備樣品恒溫箱 (G7137A)

Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116B)

Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF

表 2. HPLC 參數

Agilent 1290 Infinity II 生物液相色譜系統
流動相 A	0.1% 甲酸水溶液
流動相 B	含 0.1% 甲酸的乙腈溶液
柱溫	40 °C
流速	0.4 mL/min
進樣器溫度	8 °C

表 3. 質譜參數

Agilent 6545 XT AdvanceBio LC/Q-TOF
離子源	安捷倫雙噴射流 ESI 離子源
極性	正
氣體溫度	325 °C
干燥氣流量	8 L/min
霧化器	35 psi
鞘氣溫度	275 °C
鞘氣流量	11 L/min
毛細管電壓	3500 V
噴嘴電壓	0 V
碎裂電壓	175 V
錐孔電壓	65 V
參比質量	322.0481，922.0098
MS1 范圍	m/z 300-1250
采集速率	1 幅譜圖/秒

實驗結果與討論

采用超高惰性技術的 Altura 色譜柱在三類代表性化合物的分析中始終優于不銹鋼色譜柱。

Altura 色譜柱具有優異惰性，可明顯減少分析物因為吸附造成的信號損失。

圖 1. 不銹鋼 (SS) 和 Agilent Altura 超高惰性 HPLC 色譜柱在三類化合物中的色譜性能比較：合成肽、磷酸化核苷酸（AMP、ADP 和 ATP）和酸性代謝物（谷氨酰胺、谷氨酸和蘋果酸）。合成肽采用反相 (RP) 色譜分離，磷酸化核苷酸和酸性代謝物則采用親水相互作用色譜 (HILIC) 分離。

圖 2. 通過柱狀圖顯示，Altura 色譜柱的相對信號強度明顯更高，證明了出色的惰性和更高的分析物回收率

表 4. 采用惰性色譜柱硬件改善峰形。結果表明，金屬敏感性分析物的拖尾因子得到明顯改善。部分分析物因完全吸附無法獲得定量結果，未列入本表。多肽 “a” 和多肽 “c” 的序列參見表 1

_	拖尾因子(TF)
	肽段		代謝物
	a	c	谷氨酰胺	谷氨酸	AMP	ADP
不銹鋼	1.2	1.9	1.8	1.4	2.6	4.8
惰性	1.0	1.4	1.2	1.3	1.3	1.7
△ATF (惰性-不銹鋼)	-0.2	-0.5	-0.6	-0.1	-1.3	-3.1

結語

在所有測試的化合物類型中，采用超高惰性技術的 Altura 色譜柱產生的信號強度是傳統不銹鋼柱的 2 至 3 倍。此外，使用惰性柱硬件時拖尾因子降低，表明大多數目標分析物的峰分離度得到顯著提高（表 4）。這些結果證明了硬件表面的化學性質在實現可靠、高靈敏度分離方面的關鍵作用，對于容易與金屬發生相互作用的分析物更是如此。

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